食品中黄曲霉毒素B1 ELISA试剂盒检测方法建立及验证.docVIP

食品中黄曲霉毒素B1 ELISA试剂盒检测方法建立及验证 　　摘要：建立了黄曲霉毒素B1酶联免疫试剂盒检测的方法，并通过对食用油、花生、谷物中黄曲霉毒素B1测定进行验证。结果表明，在25 ℃条件下加入50 μL标准品溶液、50 μL抗体工作液、50 μL酶标二抗反应30 min变异性最小；ELISA试剂盒检测灵敏度高，对食用油、谷物、花生样品中黄曲霉毒素B1最低检测限分别为88.82 ng/L和48.51、176.56 ng/kg；平均回收率和变异系数符合相关规定；与高效液相色谱法相比，检测结果一致。 　　关键词：黄曲霉毒素B1；ELISA试剂盒；食用油；花生；玉米 　　中图分类号：R155.5；TS201.6 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2016）04-1008-05 　　DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.04.048 　　Establishment and Validation of Aflatoxin B1 ELISA Kit Test Method in Foods 　　XIE Ti-bo1，YI Zhong-ren1，CHEN Xu1，LIU Tian-lei1，ZHANG Lei1，WEI Li-li1， 　　LUO Gui-kun1，TAO Guang-can1，HE Fang-yang1，2 　　（1. Gui Zhou Kwinbon Food Safety Science-Technology Co.， Ltd.， Guiyang 550009，China； 　　2.Beijing Kwinbon Biotechnology Co.， Ltd.， Beijing 100012，China） 　　Abstract：This experiment has established the detection method of aflatoxin B1 whit ELISA kit，and based on the determination of aflatoxin B1 in cooking oil， peanuts，corn was validated，the results show that under the condition of 25 ℃，50 μL standard solution，50 μL antibody working liquid， 50 μL enzyme mark two antibody reacted 30min，variability was minimum；ELISA kit is high detection sensitivity，the aflatoxin B1 minimum detection limit in samples of cooking oil，corn，peanuts，were 88.82 ng/L，48.51 ng/kg，176.56 ng/kg；The average recovery and variation coefficient in accordance with relevant provisions and HPLC. 　　Key words： aflatoxin B1； ELISA kit； edible oil； peanut； maize 　　黄曲霉毒素（AFT）是由寄生曲霉和黄曲霉在生长的后期分泌产生的一类次生代谢物，是自然界中已发现的理化性质最稳定的一类霉菌毒素[1]，具有极强毒性和致癌性。黄曲霉毒素在湿热地区饲料和食品中出现的几率较高，尤其是在谷物和粮油食品中出现的几率极高，导致榨出的油及饲料中也含有黄曲霉毒素，其中黄曲霉毒素B1在曲霉毒素群中的毒性最强，分布最广[2]。 　　目前对食品、农产品中黄曲霉毒素检测方法主要有高效液相色谱法（HPLC）[3]、色谱串联质谱（LC/MS/MS）[4]、薄层色谱法[5]、荧光光谱法（FS）[6]和酶联免疫吸附法（ELISA）[7]等。ELISA是测定黄曲霉毒素含量的常用方法，所涉及的仪器及试剂比较少，操作比较简单，被很多企事业单位所采用[8]。本试验建立了ELISA对黄曲霉毒素B1的检测方法，并通过对食用油、花生、谷物中黄曲霉毒素B1的检测验证了该方法的精密度、准确度、稳定性等，以期为黄曲霉毒素酶联免疫试剂盒的制备提供一定的理论依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　1.1.1 样品与主要试剂 食用油、花生、谷物均为市售；黄曲霉毒素B1 ELISA检测试剂盒，北京勤邦生物技术有限公司；黄曲霉毒素B1标准品，纯度≥99%，美国Sigma公司；抗体工作液，酶标二抗，底物A液和B