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食药用菌多糖结构解析中核磁共振技术 　　摘要：核磁共振(Nuclear magnetic resonance， NMR)技术的发展，特别是高场核磁共振技术和脉冲-傅立叶核磁共振(Pulse and Fourier Transform nuclear magnetic resonance，FPT-NMR)技术的出现，为核磁共振技术在多糖结构解析中的应用提供了广阔的前景。本文较详细地综述了核磁共振常用脉冲及新脉冲序列在多糖结构解析中的应用，并探讨了核磁共振模拟测序软件在多糖结构解析中的应用前景。?? 　　关键词：核磁共振（NMR）；?A结构解析；?A多糖；?A二维核磁共振（2D NMR）?? 　　中图分类号：S646.01?ξ南妆晔堵耄?A 　　 　　自1945年,以F.Bloch和E.M.Purcell为首的两个小组观察到核磁共振(Nuclear magnetic resonance， NMR)现象以来，核磁共振波谱学技术发展迅速。目前,核磁共振技术已在有机化学、生物化学、临床医学、药物化学、物理化学和无机化学等多个学科领域得到了广泛的应用[1]，并已成为有机化合物结构鉴定及化学动力学等研究中最重要的一种方法。牛津大学的DWEK教授（1988年）[2]发表的以“糖生物学”为题的综述，标志着以多糖类大分子结构为基础的糖生物学研究的开始。而多糖结构的微观不均一性、高组合性（3个核苷酸组成的核酸结构最多只有6种，而由3个不同单糖残基组成的三聚寡糖的结构高达27648种）[3]、表达的非基因控制性和分析手段的局限性（以往的化学手段或质谱技术只能简单地描述多糖的单糖组成种类及残基类型，已有的自动测序仪也只能测序由8个单糖组成的寡糖）[4, 5]，一直制约着多糖研究的快速发展。?? 　　从上世纪70年代,随着核磁共振技术、特别是高场核磁共振技术和脉冲-傅立叶核磁共振（Pulse and Fourier Transform nuclear magnetic resonance，FPT-NMR)技术引入多糖研究领域[6],使多糖结构解析所需时间越来越短。食药用菌多糖作为生物多糖中的一个分支，核磁共振技术在食药用菌多糖研究中的应用又较细菌多糖及其它真菌多糖的晚10年左右[7]。Science-direct数据库的资料显示，到2006年为止，使用NMR技术阐述多糖结构的报道达2670多篇，其中阐述食药用菌多糖结构的报道只有96篇，而仅2006年，使用NMR技术报道食药用菌多糖结构的文献就达22篇，占所有报道食药用菌多糖结构文章的23%，表明利用NMR技术解析食药用菌多糖结构正呈现快速发展的趋势。?? 　　由于对食药用菌多糖结构的不了解，因此对其活性多糖的开发一直没有重大的突破，多糖产品也多以粗加工为主。本文着重阐述了核磁共振常用技术在多糖结构解析中的应用，旨在为食药用菌多糖结构与活性的分析提供一定的参考。?? 　　 　　1 一维核磁共振（One-dimensional NMR spectra, 1D NMR）技术在多糖结构解析中的应用?? 　　 　　1.1??1H NMR谱 　　在1H NMR谱中，多糖的化学位移大多集中在δ3.5~4.4[8, 12]，而δ4.4~5.8(异头质子区)共振峰是结构分析的突破口，反映糖残基构型，一般吡喃型糖残基的α构型异头氢的δ5.0，β构型的δ5.0[9]。结合异头氢和邻位氢的偶合常数J??1,2也能对异头氢的构型进行判断，在α构型糖残基中1位和2位碳上的氢为ae型，而在β构型中两个氢为aa型，根据Karplus公式[1]，β构型为J??1,2=7~9Hz，α构型为J??1,2=2~4Hz[10]。在甘露型[11]吡喃糖残基中C??2-H为平伏健（e健）时，无论是α构型还是β构型,两个氢均为ae型，因此不能以此判断其构型；同时，异头质子区内也可能有C2~C6位置乙酰化质子的信号。呋喃糖异头碳的氢化学位移为δ5.4左右，J??1,22Hz，这是呋喃糖环区别吡喃糖环的主要特征[13]。还有一些质子信号如岩藻糖C6位上的氢，其δ在1.1～1.3之间[13]；δ2.00附近的质子信号，其可能是乙酰化糖结构中乙酰基中甲基氢或氨基糖中于N-乙酰氨基中的甲基氢[14]，此类信号的出现有助于判断单糖残基种类。?? 　　1.2??13C NMR谱 　　通常所述的13C NMR谱指的是用全去耦（Decoupling）方法得到的碳谱，在去耦的同时，由于发生Overhauser效应(Nuclear Overhauser effect, NOE)，峰高不能定量地反映碳原子数量，但采用特殊的脉冲序列如抑制NOE的门控去耦谱（Gated decoupling with suppressed NOE），谱中谱线的高度