Ⅱ型糖尿病患者血栓标志物与血小板活化状态研究.docVIP

Ⅱ型糖尿病患者血栓标志物与血小板活化状态研究 　　【摘要】目的探讨Ⅱ型糖尿病患者外周血中血栓标志物（D-二聚体 D-D,血管性血友病因子（vWF）,抗凝血酶活性AT:A，纤溶酶原活性PLG:A）水平变化和血小板活化状态标志物血小板α颗粒膜糖蛋白CD62P及溶酶体膜糖蛋白CD63的阳性表达率与糖尿病血管病变的关系。方法采用免疫比浊法、发色底物法和流式细胞术分别测定79例Ⅱ型糖尿病患者（其中45例合并血管病变）和39例健康对照者外周血中的D-D、vWF 、AT:A、PLG:A水平和CD62P及CD63阳性表达率。结果糖尿病组D-D、vWF水平和CD62P、CD63的阳性表达率均明显高于对照组（P0．05），有血管病变者各标志物与无血管病变者比较，差异有统计学意义（P0．05）,而 CD62P、CD63之间呈正相关（?r?=0．673,P0．01）结论Ⅱ型糖尿病患者均存在血管内皮细胞损伤,并由此引起血小板活化、血液高凝和血栓前或血栓状态;D-D、vWF、AT:A、PLG:A、CD62P、CD63水平在一定程度上可反映Ⅱ型糖尿病患者血管病变情况，检测其水平对其诊断、观察病情及防止血管病变和血栓的发生发展均有意义。? 　　【关键词】内皮细胞；糖尿病血管病变；血栓;标志物; 血小板;α颗粒膜糖蛋白;溶酶体膜糖蛋白 　　 　　Ⅱ型糖尿病(非胰岛素依赖型NIDDM,以下简称糖尿病)是一种与遗传因素和多种环境因素相关联的以慢性高血糖为特征的代谢紊乱综合征，发病率高，合并的血管病变是患者致残、致死的重要原因之一，由于其病因机制复杂，至今尚未明了。近年来越来越多的研究显示糖尿病血管病变与患者体内血栓前状态、血管内皮损伤、血小板黏附、凝集和释放等活化功能增强及抗凝功能减退等因素密切相关［1］。? 　　我们通过检测糖尿病患者外周血中血栓标志物水平变化和血小板活化状态标志物CD62P及CD63的阳性表达率来探讨其与糖尿病血管病变的关系。 　　 　　1资料与方法? 　　 　　1．1研究对象Ⅱ型糖尿病79例，系我院2006年2月至2006年 10 月住院病人，均符合1997年美国糖尿病学会（ADA）诊断标准。年龄34～69岁，平均年龄57岁，病程6个月至18年，平均10．7年。其中并发大血管病变（经临床、影像学及心电图证实为冠心病、脑血管病等）和/或微血管病变（经眼底检查为糖尿病视网膜病变及尿白蛋白排泄率超过?20 μg/min的糖尿病肾病）者45例，未发现血管病变者34例。1周内均未治疗用药。正常对照39例为同期健康体检正常者，年龄33～66岁，平均年龄54岁。 ? 　　1．2标本采集各组均静脉采血2．8 ml，1．8 ml注入含有0．2 ml109 mmol/L枸橼酸钠试管中轻轻混匀， 3 000 r/min 离心10 min，(用于AT:A、 PLG:A、 D-D、 vWF测定)1 ml注入含有20 μl10%EDTAK2的试管中，轻轻混匀(用于CD62p、CD63测定)。? 　　1．3方法? 　　1．3．1AT:A、 PLG:A采用发色底物法, D-D, vWF采用免疫比浊法，试剂盒由美国DADEBEHRING公司提供，日本东亚SysmexCA6 000全自动血栓止血分析仪测定，严格按试剂盒及仪器说明书操作。? 　　1．3．2CD62p、CD63采用流式细胞术（FCM），美国Beckman Coulter EPICS-XL型流式细胞分析仪测定，试剂由美国Beckman Coulter公司提供，计算平均荧光强度方式进行。1 ml血室温下离心?（800 r/min）分离富含血小板的血浆，1％的多聚甲醛固定后，用异硫氰酸荧光素（FITC）标记的CD62p、CD63单克隆抗体CD62p- FITC、CD63- FITC。采用流式细胞分析仪计数5 000个血小板测定CD62p、CD63的阳性表达率。另取FITC标记的IgG即IgG-FITC作阴性对照。? 　　1．4统计学处理数据用均数±标准（x±s）差表示，采用SPSS10．0统计软件包进行方差分析及?t? 检验和直线相关分析。? 　　 　　2结果? 　　 　　2．1糖尿病组D-D、vWF水平和CD62P、CD63的阳性表达率均明显高于对照组（P0．05），有血管病变者各标志物与无血管病变者比较，差异有统计学意义（P0．05及0．01）见（表1,2）。 　　 　　2．2各试验指标的相关分析：79例Ⅱ型糖尿病患者的?D-D水平与vWF的表达水平不呈正相关（P0．05）, 而 CD62P、CD63之间呈正相关（?r?=0．673,P0．01）? 　　 　　3讨论? 　　 　　近年来越来越多的研究表明血管内皮细胞损伤与功能改变在糖尿病血管病变的发病机制中有重要作用。