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齐墩果酸联合他克莫司对肾移植大鼠Th1Th2细胞影响 　　【摘要】 目的：观察齐墩果酸（OA）联合他克莫司（FK506）对肾移植大鼠1型和2型辅助T（Th1/Th2）细胞的影响，探讨将OA应用于肾移植领域的价值。方法：以BN大鼠为供体，LEW大鼠为受体，建立大鼠同种异体肾移植模型。将48只受体大鼠按照随机数字表法均分为对照组、OA组、FK506组、OA+FK506组，术前1 d开始进行药物干预。记录每组6只大鼠存活时间，并监测其血清肌酐浓度。每组的另外6只大鼠则在术后第5天，用多功能流式点阵仪（Luminex）检测Th1细胞分泌的干扰素-γ（IFN-γ）、白介素-2（IL-2）以及Th2细胞分泌的白介素- 4（IL-4）、白介素-6（IL-6）的血清浓度；酶联免疫斑点法（ELISpot）检测表达IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-6的T细胞频率。结果：与其他各组比较，OA+FK506组的移植肾存活时间显著延长。与对照组比较，FK506组和OA+FK506组的血清IL-2的浓度显著降低，而OA+FK506组的降低更明??；各药物处理组血清IFN-γ、IL-4、IL-6的浓度显著降低，而OA+FK506组的降低更明显；表达IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-6的T细胞频率明显下降，而OA+FK506组的下降更明显。结论：OA能协同FK506抑制Th1/Th2细胞，减轻排斥反应，最终促进大鼠移植肾存活。在临床肾移植领域，OA具有协同FK506促进移植肾存活的潜力。 　　【关键词】 齐墩果酸； 他克莫司； 肾移植； 辅助T细胞； 细胞因子 　　中图分类号 R392.4 文献标识码 A 文章编号 1674-6805（2014）16-0001-03 　　当今器官移植仍处于免疫抑制剂时代，对排斥反应有效的抑制是移植成败的关键。他克莫司（tacrolimus，FK506）是免疫抑制方案中的基础用药，它通过抑制钙调神经蛋白酶，下调下游产物核因子-κB（NF-κB），使IL-2等细胞因子表达减少，从而达到较强的免疫抑制效果。虽然FK506的免疫抑制作用很强，但它仍可引发多种副作用，如移植术后糖尿病（PTDM）、感染等，而其肾毒性招致的移植肾肾病是最令人无奈且不可避免的副作用[1]。这些副作用损害了移植肾功能，缩短了移植肾存活时间。很多器官移植中心采用以低剂量FK506为基础的免疫抑制方案，以减少FK506的副作用，但引发了较多的因排斥反应导致移植肾失功的不良事件。因此，找到能协同FK506进行免疫抑制治疗的药物，以期减少FK506的用量、达到减轻其副作用的目的成为器官移植界迫切需要。 　　有研究表明，齐墩果酸（oleanolic acid，OA）具有明确的抗氧化、抗感染作用[2]。然而，OA是否能协同FK506通过抑制Th1/Th2细胞、最终促进移植肾存活，尚未见报道。本实验通过建立大鼠肾移植模型，观察OA联合FK506对肾移植大鼠Th1/Th2细胞数量和功能的影响，探讨将OA应用于肾移植领域的价值。 　　1 资料与方法 　　1.1 一般资料 　　12周龄近交系Brown Norway（BN， RT1n）和Lewis（LEW， RT11）雄性大鼠（批号：SCXK京20010-0012），每只体重200～250 g，购于北京维通利华实验动物技术有限公司。 　　1.2 手术器械与相关药品 　　显微外科手术器械（上海手术器械厂）、手术显微镜（镇江中天光学仪器厂，型号：XTS）、11-0棉纶带线、缝合针（上海医用缝合针厂）、HCA肾保存液（上海长征医院）、生理盐水、无菌冰、青霉素、10%盐酸氯胺酮注射液（江苏恒瑞医药股份有限公司）、硫酸阿托品、甲磺酸酚妥拉明注射液、肝素钠注射液、利多卡因注射液等。 　　1.3 大鼠肾移植模型的建立 　　本文在Lee[3]的基础上适当改良，采用显微外科技术，以BN大鼠为供体，LEW大鼠作为受体。供体大鼠行左侧肾脏摘除，受体大鼠行左侧肾脏原位移植，受体大鼠对侧肾脏血管结扎（代替肾切除）。术后将受体和供体大鼠置于加热垫上复温，苏醒后喂5%葡萄糖生理盐水，恢复行走后放入鼠笼，正常喂养，定时观察，防止术后尿潴留和感染等并发症。 　　1.4 分组与给药 　　按随机数字表法分为4组，每组大鼠12只：（1）对照组（DMSO-PBS溶液）；（2）OA组（OA， 25 mg/kg）；（3）FK506组（FK506， 10 mg/kg）；（4）OA+FK506组（FK506， 10 mg/kg；OA， 25 mg/kg）。OA原液购于广东南国药业有限公司，FK506原液购于诺华公司。OA原液溶解于DMSO（二甲基亚砜），FK506溶解于PBS（磷酸盐缓冲溶液）。从术前1 d开始，在各组大鼠腹腔内注射相应药物，