杜仲叶提取物及其单体槲皮素、（+）-丁香脂素抑制BMSCs成脂分化研究-外科学(骨外)专业论文.docxVIP

摘 要 目的 研究杜仲叶提取物抑制 BMSCs 成脂分化作用及其有效物质的筛选。 方法 取 SD 大鼠（一个月龄左右）1 只，通过全骨髓贴壁法分离 SD 大鼠 BMSCs； 用流式细胞学方法进行 BMSCs 鉴定；分别用苔盼蓝计数法及 MTT 法对细胞生 长曲线进行测定；配制脂肪细胞分化诱导液，初步对杜仲叶提取物及其单体化 合物进行研究，实验分 4 组：药物（1μg/ml）+阳性组、药物（0.01μg/ml）+阳 性组、阳性组、阴性组；对有效物质进行下一步实验，实验分 5 组:药物（1μg/ml） +阳性组、药物（0.1μg/ml）+阳性组、药物（0.01μg/ml）+阳性组、阳性组、阴 性组；干预 14 天后终止培养，观察各组细胞形态学改变，并用油红 O 染色法进 行细胞染色、并计数；用荧光定量 PCR 法分别检测脂肪细胞分化关键基因 PPAR γ2 及 C/EBPα表达水平。 结果 流式细胞仪检测结果显示 CD29、CD90 阳性率分别为 93.86%、92.16%， CD34、CD45 阳性率分别为 6.99%、5.31%；苔盼蓝法对第 3、4、5 代 BMSCs 进行计数，发现不同代数细胞生长趋势相仿，继续用 MTT 法检验第 3 代细胞生 长情况，结果与苔盼蓝计数一致；油红 O 染色及计数成脂率结果示，与阳性组 比较，杜仲叶提取物、槲皮素、(+)-丁香脂素各干预组脂肪细胞分化率均减少 （p0.05），且具有药物浓度依赖性；荧光定量 PCR 法检测基因结果显示：与阳 性组相比，杜仲叶提取物、槲皮素、(+)-丁香脂素各药物干预组的 PPARγ2 及 C/EBPα表达水平下调均具有显著差异（p0.05），且具有浓度依赖性。 结论 杜仲叶提取物及其化合物槲皮素、(+)-丁香脂素均具有抑制 BMSCs 成脂分 化的作用,且具有浓度依赖性，其机制与 PPARγ2 及 C/EBPαmRNA 表达水平的 下调有关。 关键词: 杜仲叶；槲皮素；(+)-丁香脂素；BMSCs；脂肪细胞 II ABSTRACT Objective To study the effect of Eucommia leaf suppression adipogenic differentiation of BMSCs and Screening of active substance. Methods SD rats ( about a month old) 1 , The SD rat BMSCs was separated by whole bone marrow paste the wall method; The cells which we have obtained were detection by flow cytometry ; Trypan blue staining and MTT assay cell growth curve; We formulated adipocyte differentiation inducing medium , Preliminary study leaf extract and and its compounds , Experiment was divided into four groups : drugs (1μg/ml) + positive, the drug (0.01μg/ml) + positive,positive,negative group ;To further study on the active substance ,Experiment was divided into five groups : drugs (1μg/ml) + positive group , the drug (0.1μg/ml) + positive group , the drug (0.01μg/ml) + positive , positive , negative group ) . drug intervention was terminated after 14 days ,We continue to observe the morphological changes in each experimental group, and cells were staining and counted after oil red O staining ;To detected adipogenic differentiation PPARγ2 and C/EBPα expression levels by quantitative PCR. Results Fl