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高效液相色谱法;一、前言;课时安排： 第一章：高效液相色谱的基本原理 6学时 第二章：高效液相色谱的仪器装置 2学时 第三章：液固、液液、键合相色谱 4学时 第四章：离子交换色谱和离子对色谱 3学时 第五章：凝胶渗透色谱 1学时 第六章：实验技术和辅助实验技术 2学时 机动 2学时;实验安排： 实验一：样品保留值的重复性测定 实验二：流动相极性变化对溶质保留值的影响 实验三：试样中苯甲酸的定性分析;参考书籍：;;;;高效液相色谱法特点：; ; HPLC的分类： ⅰ液固吸附色谱（LSC) （ 利用样品分子在固定相上吸附性能差异而分离） ⅱ液液分配色谱（LLC） （利用样品分子在两相中分配系数不同导致溶解度不同而分离） （键合相色谱 60％） ⅲ离子交换色谱（IEC） （利用样品分子的电荷性、导电性不同，导致对固定相的亲合力不同而分离） ⅳ体积排阻色谱（SEC) （利用溶质分子大小不同导致对固定相的渗透力不同而分离）;§1-2 色谱分离和保留值 一、色谱过程 定义——由于样品中各组分在不互溶的两相间平衡 分配的不同，在色谱柱中进行分离的过程 固定相：柱中固定不动 移动相：流过柱子的液体 综合来看：不同组分分离状况取决于： ⅰ热力学平衡问题：各组分分配系数、吸附力、亲 合力之间差异——影响出峰时间 ⅱ动力学平衡问题：溶质扩散系数、填料颗粒、填 充情况、流速——影响峰形;? ;二、容量因子和保留值 色谱的保留作用——化合物进入柱内，即在两相间不断进行平衡分配，由于不同化合物理化性质不同，在两相中存在量也不同。固定相中量多，柱内保留时间长；流动相中量多，柱内保留时间短。; ;§1－3色谱柱的分离效率 分离过程基本理论： ⅰ各组分在两相间分配情况：tR ——由色谱过程的热力学因素所控制 ⅱ各组分在色谱柱中的运动情况：Y1/2 ——由色谱过程的动力学因素所控制;;柱内峰扩展影响因素：;③传质;获得高柱效的几种方法：;;§1－4 分离度 Rs（Resolution) 一、分离度影响因素 ①峰的宽度（峰宽越小， Rs越大） 峰的宽窄主要反映了色谱分离的动力学特性 ②两峰的保留时间之差（△tR越大， Rs越大） 反映了色谱分离的热力学特性 二、控制分离度方法 ①改变k’ ②更换色谱柱（改变N） ③改变选择性系数 三、分离度控制的一般原则;第二章 仪器装置 液相色谱仪可分为四大系统： 泵系统 进样系统 分离系统 检测系统 ;§2－1 泵系统 作用：向色谱柱输送一个连续、恒定的移 动相。 一、对泵系统的要求 1.使用方便（易调节流量、过压保护等） 2.更换洗脱液容易、死体积小 3.有最大工作压力 4.一定流量范围（0.1~10ml/min) 5.流量稳定性好 6.流量精度高;泵系统;泵系统发展趋势;§2－2 分离系统（色谱柱）;柱效的影响因素;进样系统;§2-3 检测系统 功能：连续地将色谱柱中流出的组分随时间 变化的情况，转变成大小不同的电信 号输入到记录仪中，得到色谱图。 按检测方式不同，分为： ①总体性质检测器（通用型） 示差折射检测器、电导检测器 ②溶质性质检测器（选择型） 紫外检测器、荧光检测器 ;一、检测器的性能指标 一个理想检测器，必须具备下列条件： ①灵敏度高 ②不受温度及流动相流速变化的影响 ③响应随组分量的变化而线性地变化 ④稳定性好，操作方便 ;性能指标： ①灵敏度 S=△R/△Q ②最小检测限（检测下限） ③线性范围－检测信号呈线性变化时，最 大和最小进样量之比 ④噪音－在没有样品情况下，检测器输出 的最大振幅 ⑤漂移－检测器在一段时间内，基线随时 间的增加而产生的偏离 ;检测系统;;PAD检测器;第三章、液固色谱、液液色谱、键合相色谱;分离对象：;二、填料的类型及其选择;四、吸附强度分类;五、流动相选择的实用要求;LSC流动相分类;LSC流动相的选择;§3－2 液液分配色谱和键合相色谱;1. 原理：;2. 固定相;