第3章 植物组织培养与细胞课件.ppt

第3章 植物组织培养与细胞培养;3.3 植物组织与器官培养;3.3.1 植物组织培养的定义与分类;2.分类 根据外植体种类的不同，组织培养可分为：器官培养、组织培养、胚胎培养、细胞培养以及原生质体培养等。 根据培养方法的不同，组织培养可分为：微室培养、平板培养、悬浮培养、液体培养、固体培养等。 根据培养的功能性的不同，组织培养可分为：再生体系、离体受精、突变体选择、体细胞杂交等。;3.3.2 重要概念; 胚胎培养(embryo culture):包括原胚和成熟胚培养、胚乳培养、胚珠和子房(未授粉或已授粉的)培养，可用于研究胚胎发生以及影响胚生长的因素；用试管受精或幼胚培养可获得种间或属间远缘杂种，因此它也是研究生殖生理的有用方法；胚乳培养是研究胚乳的功能、胚乳与胚的关系，以及获得三倍体植株的一个手段。 脱分化（dedifferentiation ）:已分化好的细胞在人工诱导条件下，恢复分生能力，回复到分化组织状态的过程。 再分化（redifferentiation):脱分化后具有分生能力的细胞再经过与原来相同的分化过程，重新形成各类组织和器官的过程。; 茎尖培养:较小的仅带几个叶原基或少量幼叶的茎端部分的培养。通常用1—10mm大小的外植体来加速植物的无性系繁殖。 无性繁殖系(clone)：由同一个外植体反复进行继代培养后所得一系列的无性繁殖后代。 器官发生（organogenesis)：在组织培养中或悬浮培养中，由培养物到显示有自然的器官形成，如形成芽或根的现象。 胚状体（embryoid)：在离体培养过程中产生一种形似胚（具有明显的根端和芽端），功能与胚相同的结构。;3.3.3 植物细胞分化和形态建成; 脱分化后的细胞进行再分化的过程有两种不同的方式： （1）器官发生方式：其中芽和根在愈伤组织的不同部位分别独立形成，具有单极性结构。 （2）胚胎发生方式：在愈伤组织表面或内部形成很多胚状体，它们类似于合子胚，具有双极性结构。 ;通过胚状体途径产生再生植株有3个显著优点： （1）在一个培养物上所能产生的胚状体数目往往比不定芽数目多； （2）胚状体形成的速度快； （3）胚状体结构完整，一旦形成，一般都可以直接萌发形成小植株，因此成苗率高。;3.3.4 植物组织培养的基本步骤;花药培养 单倍体细胞和胚状体;（1）培养材料的采集;（2）培养材料的消毒;（3）制备外植体;（4) 接种和培养;（5）组培苗的练苗和移栽;这是哪个阶段？;3.3.5 植物组织器官培养;2. 愈伤组织诱导; 启动期（或诱导期）:是成熟组织在各种刺激因素的诱导作用下细胞内蛋白质及核酸的合成代谢迅速加强的过程。受激作用后分裂前细胞的主要变化有：一是呼吸作用加强，消耗氧量明显增加；二是多聚核糖体的不断增加，到有丝分裂前RNA的含量可增加300%；三是蛋白质合成加快，分裂前细胞内蛋白质的总量增加200%；四是各种与分裂有关的酶活性大大加强。;分裂期：其主要特征是：细胞数目增加很大，结构疏松，缺少有组织特征的结构，一般呈现透明状或浅颜色。;（2）愈伤组织的生长及分化;（3）影响愈伤组织培养的主要因素;3.举例;（3）无菌苗的获取：将番杏果实在浓硫酸中浸泡约1h，流水冲洗30min。再在超净工作台（图示）内用70%乙醇浸泡2-3min，在无菌滤纸上吸干或酒精灯焰烧干，再用0.1%升汞浸泡10min, 无菌水冲洗3-4次, 用无菌手术刀轻轻刮去果实被腐蚀的部分，然后将其接种于培养基（3）中，培养1周后种子长出无菌苗（图示）。 （4）愈伤组织培养：切取0.5cm长的不带腋芽的茎段，置于（2）号培养基上。3周后，茎段周围出现白色松脆的愈伤组织（图示）。愈伤组织的形成标志着接种外植体的生长状态已脱离分化状态，开始重新恢复分生能力。 ;超净工作台;（5）继代培养：将愈伤组织在无菌条件下从试管中取出，用无菌水洗净，以镊子和解剖刀剔除附着在愈伤块上的培养基，并用无菌水反复冲洗数次，直至愈伤块上无残留培养基为止。用解剖刀将愈伤块切成数小块，在接种到装有愈伤组织诱导培养基的三角瓶中，再与诱导愈伤组织相同的培养条件下继续培养。几天后，三角瓶中的小愈伤块即可逐渐长大，这一过程称作继代培养。通过愈伤组织的继代培养，原来接种的1个番杏茎段组织可繁殖出大量的新接种材料用于分化培养。 （6）分化培养：剥离白色松脆的愈伤组织继续置于（2）号培养基上，2月后，部分白色愈伤组织上出现绿色芽点（图示）。随着时间推移，绿色芽点不断膨大，其中部分形成正常绿苗（图示）。;带绿色芽点的愈伤组织;（7）生根培养：剥离绿苗接种到（3）号培养基上诱导生根（图示）。7d后开始陆续出根，3周后可有多条须根形成，生根率达95.7%。 （8）炼苗与移栽：移栽前，敞瓶炼苗