第2章 沉淀法课件.ppt

7．亲和沉淀 8．选择性变性沉淀 三、制备核酸 核酸的分离与纯化 就基因工程而言，核酸分子是其研究所涉及的主要对象，所以核酸的分离与提取是研究中很重要的基本技术。 核酸样品的质量将直接关系到实验的成败。 ③　pH值对盐析的影响 ④　温度对盐析的影响 ⑤　蛋白质浓度对盐析的影响 脱盐 方法：凝胶过滤法、透析法 2．等电点沉淀法 3． 有机溶剂沉淀法 4. 非离子型聚合物沉淀法 5. 聚电解质沉淀 6. 成盐类复合物沉淀 2) 3) 纯 化 方 法 沉淀法 色谱法 电泳法 第二章 沉淀法precipitation 第一节?基本原理与沉淀类型 一、基本原理 二、制备蛋白质 三、制备核酸 一、基本原理 二、制备蛋白质 蛋白质沉淀方法 1．? 盐析法 盐析一般操作步骤： 部分杂质“盐析”，有效成分“盐溶” 离心分离得上清液 有效成分等物质“盐析”，部分杂质“盐溶” 离心收集沉淀物 初步纯化的有效成分物质 ①???? 盐的选择 影响盐析的因素 优点： 1.??溶解度大，对温度不敏感。 水温25℃，硫酸铵的饱和溶解度为767g(4.1M) 水温为0℃，其饱和溶解度为679g(3.9M)； 2.?分级效果好。 去杂75%以上； 3.?有稳定蛋白质结构的作用。 经2-3M硫铵盐析的蛋白可置低温保存1年以上； ②