无菌操作的注意事项-07.11课件.pptVIP

* * 无菌操作的注意事项 一.消毒与灭菌的概念 消毒是指对病原微生物的致死作用，但不能杀死芽胞等全部微生物。所以消毒是不彻底的，不能代替灭菌。 凡用于消毒的化学药品称为消毒剂。消毒剂有液体的、固体的和气体的。消毒剂的种类很多，性质不一，因此应根据具体情况选择既安全又有效的消毒剂。常用的消毒剂有70-75％的 乙醇或异丙醇溶液、0.1-02％的新洁尔灭溶液、3-6％过氧化氢溶液等。 微生物实验室 一.消毒与灭菌的概念 灭菌是指用物理或化学手段完全杀灭或消除活的微生物的过程。从定义来看，灭菌是一绝对概念，一件物品要么有菌，要么无菌。 两个概念的异同点。 灭菌和消毒是两个不同的概念，有共性，也有区别。其共性是杀灭微生物以控制其污染。区别是（1）杀灭微生物的完全性的差异，灭菌要求完全杀灭微生物。灭菌后的物品不应含有任何活的微生物。而消毒是不完全的，只能杀灭一部分微生物。（2）方法上的差异。灭菌的方法有多样性，而消毒常常是借助化学物质。（3）效果检查的差异。灭菌效果是用无菌检查法检测，而消毒效果是以消毒剂的效价来评定。 微生物实验室 二.消毒剂的选择和交替使用 选择消毒剂时务必考虑以下因素：需消毒表面与消毒剂的适应性、人员的安全性、环境中微生物的种类、消毒剂的使用方法和使用频率等。此外为了防止环境中的微生物对同一种消毒剂产生耐受性，消毒剂应定期交替使用。尽管GMP没有明确要求要求交替使用消毒剂，但这已成为一种惯例。目前交替使用消毒剂已在制药企业广泛实施。 几乎所有的消毒剂在使用后都有残留，经过不断积累并对消毒效果造成不良影响。此外，残留于设备或设施表面的消毒剂会影响外观，使设备看上去很脏。因此，在消毒剂使用过程中应定期用无菌水或乙醇为溶剂的试剂（用之前经过除菌处理）对残留物进行清洗。 微生物实验室 三.我们常用的几种消毒剂 1.醇类 因其具有抗菌作用，乙醇被用作消毒剂已有几百年的历史。乙醇类消毒剂的杀菌机制是使微生物的蛋白质变性，在没有水的情形下，蛋白质不易变性，因此，在乙醇中加入一些水会使杀菌效力更好。对于干燥表面消毒时，乙醇的杀菌效果在体积比为70-75％时为最强。我们无菌室使用75％的乙醇和70％的异丙醇来消毒工作台面、物料包装表面、操作者手套。以醇类为基质的化合物之所以被广泛使用是因为它们蒸发后没有任何残留。然而，乙醇的杀菌效果是有限的，特别是它对人体表面散发到环境中的一些微生物消毒效果并不理想。要想使洁净区内的微生物得到有效控制，务必定期对洁净室进行甲醛熏蒸灭菌。 微生物实验室 三.我们常用的几种消毒剂 3.过氧化氢和过氧乙酸 浓度为3-6％的过氧化氢溶液能杀死一般的细菌，当浓度高于6％时，即能杀死细菌芽胞。过氧乙酸的杀菌能力高于过氧化氢，它在低温下也有很强的杀菌能力且无任何有毒残留物。与过氧化氢相比，气态过氧乙酸的缺陷在于易挥发并且有刺激性气味。过氧化合物的杀菌普非常广，但是对某些金属有腐蚀作用。 微生物实验室 四.常用的几种灭菌方法 1.热力灭菌 利用高温杀灭微生物，是一种应用广泛而又简便有效的灭菌方法。可分为干热灭菌和湿热灭菌。 （1）干热灭菌法 利用强热使蛋白质凝固，而导致细胞死亡。常用的有火焰、灼烧和干烤等。一般180℃以上持续45分钟即可灭菌。 （2）湿热灭菌法 通过热蒸汽或沸水使细菌蛋白质变性而杀灭微生物。分为煮沸灭菌、流通蒸汽灭菌和高压蒸汽灭菌法。前两种方法只能杀死细菌繁殖体，不能完全杀灭芽胞。 微生物实验室 四.常用的几种灭菌方法 煮沸灭菌法：是加热使水沸腾而杀灭细菌的方法。可在常压下在水中煮沸（100℃）一段时间达到灭菌的效果。在水中加2％的碳酸钠煮沸（温度可提高到105 ℃）20min，非芽胞菌和多数芽胞菌都可被杀灭，但少数抵抗力极强的芽胞仍可存活。 高压蒸汽灭菌法为最可靠、最适的灭菌法。凡耐高温和潮湿的物品都可应用本法。它是通过加压提高蒸汽温度，由于蒸汽的穿透力强、温度高，所以灭菌效果最好。 微生物实验室 四.常用的几种灭菌方法 2.气体灭菌 利用化学消毒剂形成的气体来杀灭微生物的措施，称为气体灭菌法。多种化学消毒剂如甲醛、环氧乙烷等。常用的灭菌剂为环氧乙烷。 3.辐射灭菌 有两种类型，一是引起电离的X射线、r射线，称为电离辐射；一是非电离辐射的紫外线、红外线、微波等属于电磁波辐射。 紫外线辐射的穿透能力很弱，不能穿透正常的包装材料，即使是一层薄的普通玻璃、塑料薄膜、纸等也无法穿透。而且紫外灯的寿命都是有限的，最长的寿命为2000h,所以紫外灯应定时更换，而不应等到不亮时才换。 微生物实验室 四.常用的几种灭菌方法 4.过滤灭菌法 过滤灭