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培养基的配制苏琬晴，2015-10-13什么是培养基？培养基（Medium）是供微生物、植物和动物组织生长和维持用的人工配制的养料，培养基一般都含有水、氮源、无机盐碳源、生长因子。培养基的分类化学分类： 天然培养基 组合培养基 半组合培养基 培养基的分类物理分类： 固体培养基 半固体培养基 液体培养基 脱水培养基（商品培养基）培养基的分类微生物分类： 选择性培养基 鉴别培养基培养基的配制原则1.选择适宜的营养物质 2.营养物质浓度及配比合适 3.控制pH条件（7.20-7.40） 4.原料来源的选择 5.灭菌/过滤处理关于我们水：注射用水氮源：大豆蛋白胨无机盐：柠檬酸铁、 L-精氨酸单盐酸盐、硫酸锌七水合物、硫酸铜溶液、亚硒酸钠溶液、碳酸氢钠等碳源：葡萄糖生长因子： L-谷氨酸、L-谷氨酰胺、DL-苏氨酸、L-丝氨酸、L-天冬氨酸、L-胱氨酸、叶酸、维生素C、维生素B6、胰岛素、抑肽酶其他：P188，Hepes等培养基 培养基主要成分及其作用葡萄糖：是细胞的功能物质和主要碳源物质，然而其浓度过高则会产生大量乳酸，因而需要对其进行浓度控制。谷氨酰胺：是细胞的功能物质和主要氮源物质，然而当其浓度过高则会产生大量的代谢物氨，因而也需对其进行浓度控制。胰岛素：是细胞重要的生长因子，能够刺激葡萄糖的利用以及RNA、蛋白质和磷酸和合成。 培养基主要成分及其作用亚硒酸钠：谷胱甘肽过氧化酶的辅因子，拥有抗过氧化物的能力，从而提高细胞在无血清培养基中的生长速率和活性。NaHCO3：使细胞代谢产生的CO2 及时溢出培养瓶，再通过稳定调节恒温箱中的CO2 浓度 （5%）与培养基中的NaHCO3的含量使pH处于平衡状态。P188：降低机械剪切力对细胞的损害。 培养基主要成分及其作用Hepes:对细胞无毒性作用，它是一种氢离子缓冲剂，能够长时间控制恒定的pH范围。F12：完全培养基，含有细胞生长所需成分，为细胞提供充足养分。DMEM：是一种含各种氨基酸和葡萄糖的培养基。酚红（包含在完全培养基中）：pH指示剂，当pH小于6.8，呈黄色时，当pH大于8.4时，呈红色。培养基配制过程配置前准备制定配液计划，确定目标储罐。进行配制罐、储罐及过滤支路的CIP。养基配制罐CIP后，将滤芯安装至目标过滤器，进行滤芯的浸润与完整性测试。进行储罐带过滤支路的SIP，并确保滤芯在灭菌过程中没有承受反压及0.3bar以上的正压。准备好所需的洁净20L装液桶、10L不锈钢桶、3L量杯、500ml蓝盖瓶、量筒、搅拌子、药匙等。进行浓配液的配制，其中5mol/L氢氧化钠溶液可根据使用量配制，并使用洁净的3L量杯盛装待用。培养基配制过程培养基配制进行B2115室注射用水冷点的灭菌及冷却的开启。进行B2110室注射用水冷点的灭菌及冷却的开启，并使用洁净20L装液桶加入已冷却的注射用水20L。进行配制罐pH变送器的校准，完成后将pH电极安装到配制罐上。将配制罐称重模块清零。根据配液量进行配液参数设置，运行培养基配制程序。预加水完毕后，弹出加料提示窗口，直接关闭提示窗口，按顺序称取所需的物料通过配制罐上的人孔投到配制罐中进行溶解。培养基配制过程物料添加完毕后，盖上人孔并拧紧，点击控制界面上三角形叹号图标，重新弹出加料提示窗口，点击确认，进入预定容步序。预定容至设定值后，弹出调整pH值窗口，使用5mol/L氢氧化钠溶液调整培养基pH至设定值，盖上人孔并拧紧，点击窗口中的确认按钮，进入定容步序，定容后培养基配制完成，进入定容后的搅拌倒计时。清理配液现场，将剩余物料分类放回相应的货架存放，用纯化水擦拭工作桌面及地面，将垃圾分类放好，用纯化水冲洗配液用器具至洁净无泡沫。注意事项1.氢氧化钠溶液配制会产生大量的热量，故需预先配制放置到室温后使用。2.配制过程使用的常温注射用水是指冷却至35℃以下的注射用水3.大豆蛋白胨加入后也会影响观察，故留在最后加入。4.胰岛素、抑酞酶容易降解失去效用，而且加入后会产生泡沫，影响培养基澄清度观察，故留在最后加入。… …补充培养基批号培养基批号命名的方式为 YYYYMMDD-A/B/C/D例1：2013年1月1日配制的培养基分别过滤到2#、3#培养基储罐，若过滤次序为先2#后3#，则2#储罐的培养基批号A，3#储罐的B。例2：2013年1月2日配制的培养基先后过滤到2个50L装液桶中，则2桶培养基的批号分别AB。　谢谢！　 　　ＴＨAＮＫ　ＹＯＵ　　EMB琼脂培养基原理 EMB培养基含有伊红和美蓝两种染料作为指示剂。蛋白胨提供细菌生长发育所需的氮源、维生素和氨基酸，乳糖提供发酵所需的碳源，磷酸氢二钾维持缓冲体系，伊红 Y 和美蓝抑制绝大部分革兰氏阳性菌的生长。琼脂是凝