第六章 放射免疫分析和其他免疫分析幻灯片.pptVIP

（二）反应介质 缓冲液 pH=7.5 PB （三）温育温度与时间 放射免疫分析 0.5%BSA 正常兔血清 放射免疫分析 （四）反应方式 1. 平衡法 Ag* + Ag + Ab→ 反应几率相同 2. 非平衡法 Ag + Ab→ + Ag*→ Ag*反应几率 Ag 放射免疫分析 （五）标准曲线类型 B% 标准品 Bx/Bo（%） 标准品 lg标准品 B% 标准品 Logit B/T（%） 放射免疫分析 F% 标准品 lg标准品 Logit Bx 标准品 B/F 标准品 Bo/Bx Logit-Log模型 放射免疫分析 特异性、 精密度、 灵敏度、 准确性 方法的考核 放射免疫分析 因仪器、试剂和操作等失误而造成的倾向性偏差 自然因素造成，不易找到原因，又无倾向性 可避免 不可避免 误差 系统误差 随机误差 放射免疫分析 特异性(specificity) 识别能力 交叉反应% 精密度(precision) 反映随机误差大小 精↑误差↓ 用样品实测剂量D的SD或CV表示 精密度图( precision profile, P-P ) 放射免疫分析 灵敏度(sensitivity) 指零剂量的精密度(SD) 零剂量的SD↓ 灵敏度↑ 最小可测剂量χ零剂量的SD 2SD或3SD 剂量测定值 SD 零剂量SD 样品剂量D 剂量测定值 D CV 工作范围 10％ ( P-P ) 放射免疫分析 准确性(accuracy) 指测定值与真实值接近程度 (1) 外加标准品的回收率 外加标准品的回收率= 加标准品后的测定值-未加的测定值 所加标准品的量(已知) ×100％ 放射免疫分析 过零点直线: 准确性好 不过零点: 存在干扰因素 非直线: 测定值不准确 (2) 高含量样品, 用缓冲液等倍数稀释, 则测定值与样品量, 呈: 测定值 样品量 免疫放射分析(IRMA) 利用过量的放射标记抗体，测定样品中的抗原或半抗原 基本概念 过量*Ab+Ag，测定复合物放射性（多余Ab通过一定手段除去） ，其活度与待测Ag量呈正相关。 基本原理 免疫放射分析(IRMA) RIA ＋ ＋ *Ag IRMA + *Ab 免疫放射分析(IRMA) 一个IRMA系统需要2个抗体 测量作用 分离作用 IRMA分离游离Ab和复合物，采用单克隆Ab作分离剂 免疫放射分析(IRMA) 双标记抗体法 ↓ SP－Ab1 ＋ Ag → SP－Ab1－Ag *Ab2 *Ab3 SP－Ab1－Ag *Ab2 *Ab3 分类 双抗体夹心法 SP－Ab1＋Ag → SP－Ab1－Ag ↓ *Ab2 SP－Ab1－Ag－*Ab2 ＋*Ab2 固相抗体 免疫放射分析(IRMA) 标记第三抗体法（标记双抗法） ↓ SP－Ab1 ＋ Ag ＋ Ab2 → SP－Ab1－Ag － Ab2 *Ab3 *Ab3 SP－Ab1－Ag－Ab2－ 免疫放射分析(IRMA) IRMA与RIA的区别 非放射标记免疫分析 非同位素免疫分析 Non-isotopic immunoassay 酶免疫分析 (enzyme immunoassay) EIA 化学发光免疫分析(chemiluminescence immunoassay) CLIA 免疫荧光技术 (immunofluorescence technique) IFA * * 竞争放射分析 竞争放射分析 利用放射分析技术，定量分析超微量物质 标记物 待测物 +特异结合试剂(限量) 竞争 结合反应 定量分析 (10-9～10-12g) 概述 竞争放射分析 几乎所有受体和一些神经递质均可用RRA测定 但受体的稳定性、保存等问题限制其应用 激素受体－激素的特异性结合 特异试剂－组织受体 放射受体分析法RRA 不需制备抗体 易取材灵敏度、特异性不如RIA 同RIA 特异试剂－甲状腺素结合球蛋白 竞争性蛋白结合分析法 CPBA 灵敏度高 特异性强 重复性好 准确性好 操作简便 利用放射性测量的高灵敏度 免疫学抗原－抗体高特异性结合 放射免疫分析法 RIA 特点 原理 分类 竞争放射分析 特点 2．特异性强 1．灵敏度高 10-9～10-12g 10-15g 3．操作简便 4．应用广泛 放射免疫分析 Ag* Ab 放射性核素标记抗原 和非标记抗原 同时 与限量的特异抗体进行竞争结合反应 (定量) （限