疾病相关基因的克隆与功能研究 教学课件.ppt

第二十四章 疾病相关基因的克隆 与功能研究 前言 几乎所有的疾病均在一定程度上与基因有联系。基因的改变，或是疾病发生的原因，或是疾病发生的结果，或是疾病发生时的伴随现象。因此，如能够检测疾病相关的基因的改变，必可揭开疾病的发生和发展的机理。 疾病相关基因 致病基因 疾病易感基因 第一节 克隆疾病相关基因的原则 第二节 疾病相关基因克隆的策略和方法 第三节 疾病相关基因的功能研究 第一节 克隆疾病相关基因的原则 鉴定克隆疾病相关基因的关键是确定疾病表型和基因间的实质联系 鉴定克隆疾病相关基因需要多学科多途径的综合策略 确定候选基因是多种克隆疾病相关基因方法的交汇 一、鉴定疾病相关基因的关键是确定疾病表型和基因间的实质联系 正确的诊断是鉴定疾病基因的先决条件 确定疾病的遗传因素，即通过孪生子分析，领养分析和同胞罹患率分析等确定遗传因素是否在疾病发病中的作用及其作用程度。 二、鉴定克隆疾病相关基因需要多学科多途径的综合策略 疾病相关基因鉴定克隆策略示意图 三、确定候选基因是多种克隆疾病相关基因方法的交汇 有许多途经能够达到最终鉴定疾病相关基因的目的，这些方法最终将交汇在候选基因上。一旦候选基因被鉴定，即可筛检患者中该基因的突变。候选基因可不依赖其在染色体位置而予以鉴定，但常用的策略仍然是首先找出候选染色体区域，然后在此区域内鉴定候选基因。 第二节 疾病相关基因克隆的策略和方法 不依赖染色体定位的疾病相关基因克隆策略 定位克隆是后基因组时代的常用策略 利用生物信息学数据库有助于疾病相关基因的克隆 一、不依赖染色体定位的克隆策略 功能克隆 返回目录 返回主页 抗体与核糖体上翻译处的肽链结合，形成沉淀，获得mRNA mRNA DNA 转录 翻译 正常人 患者 Representative difference analysis 返回目录 返回主页 二、定位克隆 从一种疾病相关基因的染色体定位出发，逐步缩小范围，最后克隆该基因。 返回目录 返回主页 第三节 疾病相关基因的功能研究 观察基因在细胞内，在模式动物体内的作用，了解基因在人体内的功能，确定基因突变与疾病发生的关系。 高表达 抑制 一、基因比对及功能诠释 常用的两大双序列比对工具是BLAST和FASTA, 分别由美国国立生物技术信息中心（NCBI）和欧洲生物信息学研究所（EBI）开发和维护。 NCBI的主页是/； EBI的主页是http://www.ebi.ac.uk/。 二、利用工程细胞研究基因功能 （一）采用基因重组技术建立基因高表达工程细胞系 （二）基因沉默技术抑制特异基因的表达 三、研究生物大分子间的相互作用可确定基因功能 在一些情况下, 即使对基因的序列、结构和表达模式有清楚的认识，但仍然难以阐明基因所表达的蛋白质的功能。此时通过研究该蛋白质与已知功能蛋白质的相互作用，无疑将非常有助于对该蛋白质功能的了解。 常用的高通量筛查蛋白质间相互作用的方法是酵母双杂交技术（见第二十章）和噬菌体展示技术。 四、利用基因修饰动物整体研究基因功能 尽管在体外对基因功能的研究可提供大量信息，但是只有在整体内的研究才能真实反映该基因在体内的真正作用。 通过在实验动物，持别是小鼠体内进行相关的基因操作，获得基因修饰动物品系，已成为在体研究基因功能的重要手段，常用的有转基因动物和基因敲除动物。