佐剂关节炎大鼠血管新生COX―2PI3KAKT和细胞因子相关性研究.docVIP

佐剂关节炎大鼠血管新生COX―2PI3KAKT和细胞因子相关性研究 　　【摘要】 目的：观察佐剂关节炎大鼠环氧化酶-2（COX-2）、磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶（AKT）的表达，以及其与白细胞介素-6（IL-6）、大鼠白细胞介素-10（IL-10）、血管内皮生长因子（VEGF）细胞因子的关系。方法：将20只大鼠适应性喂养1周后，随机分为正常对照组（NC组）、模型对照组（MC组），每组10只。MC组每只大鼠右后足趾皮内注射弗氏完全佐剂0.1 ml，复制佐剂关节炎大鼠模型，NC组每只大鼠右后足趾皮内注射蒸馏水0.1 ml，两组均给药18 d。结果：与NC组比较，MC组足肿胀率、关节炎指数均明显升高，差异均有统计学意义（P0.01）；MC组的IL-6、VEGF指标也均明显升高，而IL-10指标明显下降升高，差异均有统计学意义（P0.01）；MC组的COX-2、PI3K、AKT指标均明显升高，差异均有统计学意义（P0.01）；MC组大鼠COX-2与IL-6、VEGF呈正相关，与IL-10呈负相关；PI3K与IL-6、VEGF呈正相关，与IL-10呈负相关；AKT与IL-6、VEGF呈正相关。结论：COX-2、PI3K、AKT与IL-6、IL-10、VEGF细胞因子密切相关。 　　【关键词】 类风湿关节炎； 环氧化酶-2； 磷脂酰肌醇3-激酶； 丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶； 血管新生 　　中图分类号 R331.32 文献标识码 B 文章编号 1674-6805（2016）6-0146-02 　　doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2016.6.081 　　类风湿关节炎（RA）是一种以滑膜增生、关节破坏为主要特征的自身免疫系统疾病。滑膜炎主要病理表现为炎性细胞浸润和血管增生。近些年，研究证实PI3K/AKT通路参与RA滑膜血管增生病变[1]。本研究采用酶联免疫吸附法（ELISA）技术，检测佐剂关节炎大鼠血管新生相关的COX-2、PI3K、AKT的变化，研究其与类风湿关节炎IL-6、IL-10、VEGF等因子之间的关系。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验动物 　　SPF级雄性SD大鼠20只，体重（200±20）g，由上海杰思捷实验动物有限公司提供，许可证号码：SCXK（沪）2013-0006。 　　1.2 药品及试剂 　　弗氏完全佐剂（美国Sigma公司生产），蒸馏水（弋矶山医院中心实验室提供），IL-6试剂盒、IL-10试剂盒、VEGF试剂盒、COX-2试剂盒、PI3K试剂盒、AKT试剂盒（武汉华美生物工程有限公司提供）。 　　1.3 实验仪器 　　离心机（安徽嘉文仪器有限责任公司），电热恒温箱（上海三发科学仪器有限公司），洗板机（雷杜生命科学股份有限公司），漩涡混合器（其林贝尔仪器制造有限公司），酶标仪（雷杜生命科学股份有限公司）。 　　1.4 造模方法 　　将20只大鼠适应性喂养1周后，随机分为正常对照组（NC组），模型对照组（MC组），每组10只。MC组每只大鼠右后足趾皮内注射弗氏完全佐剂0.1 ml，复制佐剂关节炎大鼠模型，NC组每只大鼠右后足趾皮内注射蒸馏水0.1 ml，两组均给药18 d。 　　1.5 指标检测 　　1.5.1 大鼠足肿胀率检测 于致炎前、致炎后应用排水法分别测定每只大鼠右后足容积，并计算出大鼠足肿胀率[肿胀率（%）=（致炎后足容积-致炎前足容积）/致炎前足容积×100%]。 　　1.5.2 大鼠关节炎指数检测 于致炎前、致炎后计算大鼠关节炎指数：采用5级评分法，四肢关节炎指数之和代表每只大鼠的关节炎指数，积分越高，关节症状越严重，最高分值为16分。评分标准：0分，关节正常无红肿；1分，趾关节红肿；2分，趾关节和足趾肿胀；3分，踝关节以下的足爪肿胀；4分，包括踝关节在内的全部足爪肿胀、关节严重变形[2]。 　　1.5.3 大鼠IL-6、IL-10、VEGF、COX-2、PI3K、AKT指标检测 于实验结束后，大鼠腹主动脉取血，严格按照试剂盒要求，采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测大鼠IL-6、IL-10、VEGF、COX-2、PI3K、AKT指标水平。 　　1.6 统计学处理 　　采用SPSS 17.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料用均数±标准差（x±s）表示，比较采用t检验；非正态分布数据采用秩和检验；相关性分析采用多元回归相关分析。P0.05为差异有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1 两组大鼠足肿胀率和关节炎指数比较 　　给药前，两组大鼠足肿胀率、关节炎指数比较，差异均无统计学意义（P0.05）；给药后，MC组足肿胀率、关节炎指数均明显高于NC组，差异均有统计学意义（P0.01），详见表1。 　　2.2