广藿香抑制肠推进药效指纹图谱构建和谱效关系研究.docVIP

广藿香抑制肠推进药效指纹图谱构建和谱效关系研究 　　[摘要] 目的 构建广藿香抑制肠推进的高效液相色谱（HPLC）药效指纹图谱，并分析图谱中各成分与抑制肠推进作用的相关性。 方法 以乙酸乙酯、丙酮、甲醇、水分别提取广藿香，提取物分别行小鼠肠推进实验，筛选药效最佳者，以HPLC法建立指纹图谱，以夹角余弦法计算相似度，以灰色关联法分析图谱中各特征峰峰面积与肠推进效应的关联度大小。 结果 广藿香甲醇提取物对小鼠胃肠蠕动抑制作用最强，此基础上建立10批广藿香药材药效指纹图谱，相似度均大于0.81，共有18个特征峰，特征峰P5、P10、P12、P13和P14对应成分与药效关联度最大，顺序为P14 P13 P5 P12 P10。 结论 广藿香抑制肠推进药效指纹图谱应在甲醇提取物基础上建立，该抑制作用主要由多种成分主导。 　　[关键词] 广藿香；药效指纹图谱；高效液相色谱；谱效关系；灰色关联法 　　[中图分类号] R284.1 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2013）12（b）-0017-04 　　广藿香（Herba Pogostemonis）为唇形科植物广藿香Pogostemon cahlin（Blanco）Benth.的干燥地上部分，是常用的芳香化湿药，有芳香化浊、和中止呕、发表解暑之功效[1]。临床上主要用于治疗暑湿所致的胃肠功能失调，如食欲不振、恶心呕吐、泄泻等。现代研究表明，广藿香调节胃肠的有效成分主要是水溶性成分，通过抑制胃肠运动功能，达到解痉作用；通过增加胃酸分泌、提高胃蛋白酶活性、提高血清淀粉酶活性，消除胃肠道的消化和吸收障碍，从而改善脘腹胀痛、嗳气等消化系统症状，并有镇痛和止泻作用[2]。 　　中药指纹图谱是基于中药成分的多样性和复杂性建立起来的一种质量控制方法。传统的指纹图谱构建方式侧重的是提取尽可能多的成分，并实现有效分离，缺点是与药理效应没有建立必要联系。中药谱效关系学是近几年发展起来的将指纹图谱与药效结合起来考察中药内在质量及其成分与药理活性间关系的新方法[3]，是在中医药理论现代研究的基础上，以中药指纹图谱为基础，以效应学为主要内容，应用生物信息学方法，建立中药指纹图谱与中药疗效关系的一门学科[4]。本研究以不同梯度极性溶媒提取广藿香，分别进行药理实验，在最强药理效应的溶媒提取物基础上，构建了其抑制肠推进的HPLC药效指纹图谱，并在构建的广藿香抑制肠推进药效指纹图谱基础上，采用灰色关联法分析了其谱效关系。 　　1 仪器与试药 　　戴安高效液相色谱仪（U3000），广藿香药材购自广州致信中药饮片有限公司、广东天城中药饮片有限公司、广东省药材公司中药饮片厂，经鉴定为唇形科刺蕊草属植物广藿香Pogostemon cablin（Blanco）Benth.。液相用甲醇、乙腈均为色谱级，磷酸、冰醋酸为市售分析纯。 　　SPF级NIH小鼠18～20 g，雌雄各半，由南方医科大学实验动物中心提供（合格证号：SCXK粤2006-0015）。 　　2 方法与结果 　　2.1 广藿香抑制肠推进药效指纹图谱的构建 　　2.1.1 最佳提取溶媒筛选 　　2.1.1.1 溶剂极性选择 在文献研究确认广藿香抑制胃肠作用为水溶性成分和溶解性预实验基础上，参照溶剂极性表，选定梯度极性（溶剂）为：4.3（乙酸乙酯）、5.4（丙酮）、6.6（甲醇）和10.2（水）。 　　2.1.1.2 药理实验供试液制备 称取广藿香药材100 g，置蒸馏烧瓶中，加适量水，以水蒸汽蒸馏法蒸馏5 h，趁热以滤布滤过，浓缩，90℃干燥，得干浸膏。以相应溶剂超声溶解，以滤纸滤过，浓缩，干燥，以水溶解（或混悬），即得。 　　2.1.1.3 肠推进实验 NIH小鼠100只，按体重随机分为极性4.3、5.4、6.6、10.2和阴性对照5组，每组各20只，雌雄各半，给药前禁食24 h，但不禁饮。灌胃给药0.1 mL/10 g，剂量在预实验基础上建立，阴性对照组给予等量生理盐水，给药后20 min灌胃给予墨水0.4 mL/只，20 min后脱椎处死，测量胃喷门到墨水最前沿长度。 　　2.1.1.4 实验结果 与阴性对照比较，极性6.6和10.2提取物均表现出抑制肠推进作用，组间比较采用t检验，极性6.6组差异有统计学意义（P 0.05）。决定选取甲醇提取液为药效指纹图谱用供试液。见表1。 　　表1 广藿香不同极性去油水提取物对小鼠肠推进功能实验结果 　　注：与阴性组比较，*P 0.05；“-”表示无数据 　　2.1.2 HPLC指纹图谱建立 　　2.1.2.1 色谱条件 C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），柱温30℃，流速0.6 mL/min，进样体积20 μL，检测波长333 nm，流动相