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非小细胞肺癌中血管内皮生长因子相关性研究 　　河南科技大学第一附属医院肿瘤科 河南科技大学肿瘤研究所 河南洛阳 471003。 　　【摘 要】目的本研究通过CT灌注成像技术，探讨良恶性肺部病变血流灌注首过期峰值（PH）的差别，应用免疫组织化学方法检测肺标本中VEGF的表达水平，探讨其与首过期峰值（PH）相关性。材料与方法对32例非小细胞肺癌，25例良性病变进行灌注CT扫描，记录首过期峰值（PH）；应用免疫组织化学方法（LSAB）检测组织标本中VEGF的表达水平，分析与灌注CT首过期峰值的相关性。结果 （1）肺恶性病变首过时间峰值显著高于肺良性病变首过时间峰值。当初峰值诊断肺良恶性病变的界值点取值为15HU，鉴别肺恶性病变的敏感度为75%，特异度为88%，准确率80.1%，阳性预测值为88%，阴性预测值为73.3%；（3）肺癌组织VEGF表达水平与灌注增强CT初峰值存在显著正相关性；结论（1）肺部灌注CT首过时间峰值有助于肺部良恶性肿瘤的鉴别诊断；（2）灌注增强首过时间PH值可以推测肿瘤VEGF表达水平和新生血管分布特征 　　【关键词】非小细胞肺癌血管内皮生长因子；微血管密度灌注CT 　　肿瘤生长和发展依赖于血管的形成。血管内皮生长因子（VEGF）在肿瘤间质形成和新血管形式中起关键作用，与肿瘤侵润，转移和预后有关，和肿瘤微循环形成密切相关[1]。肿瘤的CT增强程度反映了瘤内血管密度及血流变化 [2] 　　本研究采用可重复实施的影像学检查，结合LSAB法检测肿瘤组织VEGF表达水平，探讨增强CT峰值与VEGF相关性，判断肿瘤微循环状况，以满足良、恶性肿瘤鉴别诊断、疗效评估、判断预后等临床需要。 　　1资料与方法 　　1.1临床资料 收集2011年3月至2014年3月在住院需行手术治疗，并行CT检查的周围型非小细胞肺癌患者32例及肺良性病变患者25例。其中腺癌20例，鳞癌12例，共32例，男22例，女10例，年龄24-70岁，平均年龄56.03±9.46岁，良性病变25例，其中结核11例，炎性假瘤5例，错构瘤5例，纤维瘤1例，慢性机化性肺炎3例，男19例，女6例，年龄36-58岁，平均年龄48.2±10.7岁。肿块大小1.5-7.0cm，平均直径3.87±1.45cm。 　　1.2方法 　　1.2.1 CT检查方法 采用德国Siemens 320型多层螺旋CT扫描机，患者行同层动态增强扫描，用高压注射器以7ml/s经肘静脉注入非离子型对比剂（优维显，300mg/ml）40ml，对病灶区进行连续扫描，层厚3mm、kv120、84mAs、螺距1.5，首过屏气灌注扫描时间为10s，将数据输入工作站，使用Siemens dynamil evaluation软件处理，在病灶同层主动脉设置感兴趣区（ROZ），计算病灶初峰值（PH）。 　　1.2.2 病理标本处理 新鲜手术标本离体后，按CT扫描方法标记病灶最大层面及方向；病灶取材尽量与CT扫描最大层而一致。10%中性甲醛固定，常规石蜡包埋备用。以5?m层厚连续切片，经HE染色筛选后，制备涂胶白片。 　　1.2.3 LSAB法免疫组化染色 　　（1）主要试剂 鼠抗人VEGF单克隆抗体、（购自Santa Cruz Biotechnology公司），生物素化羊抗鼠抗体、SP复合物（均购自DAKO公司）。 　　（2）严格按LSAB实验流程对5?m厚石蜡切片依次处理，最后DAB显色，苏木素复染，脱水、固定后，中性树脂封片，用PBS代替 一抗作为空白对照。 　　1.3 结果判定 　　以Volm[3]的标准执行，肿瘤细胞浆或细胞膜显示棕黄色清晰颗粒者为阳性，每张切片100倍下选定10个视野，每个视野100个细胞，共计1000个细胞，计算出每张切片上VEGF阳性表达百分数。 　　1.4统计学处理 　　数据用指标阳性表达率、均数±方差，方差分析，秩和检验、直线回归分析，用SPSS13.0软件进行统计分析，以P0.05为显著差异。 　　2结果 　　2.2灌注CT扫描首过时间峰值对肺良恶性病变诊断的评估 　　肺恶性结节首过时间峰值显著高于肺良性病变（P0.05）（表1）。当首过时间峰值（PH）诊断肺良恶性病变的界点取值为15HU，鉴别肺恶性病变的敏感度为75%，特异度为88%，准确率80.1%，阳性预测值为88%，阴性预测值为73.3%（表2）。 　　表1 肺良性和恶性病变灌注CT首过时间峰值的比较 　　Group No.of case PH（Hu）（±SD） p 　　Lung cancer 32 22.05±14.07 　　Benign pulmonary lesion 25 8.81±5.86 0.000 　　表2 灌注CT扫描首过期峰值鉴别肺部良恶性病变的预测