非小细胞肺癌LSD1和VEGF表达及意义.docVIP

非小细胞肺癌LSD1和VEGF表达及意义 　　【摘要】目的 探讨非小细胞肺癌（NSCLC）的组织中组蛋白特异性去甲基化酶1（LSD1）与血管内皮生长因子（VEGF）的表达及生物学行为的关系。方法 用免疫组织化学SP法检测60例NSCLC与癌旁组织及正常组织中LSD1与VEGF的表达，分析其表达与肺癌组织类型、TNM分期、分化程度及淋巴结转移等的相关性。 结果 免疫组化显示LSD1与VEGF蛋白在非小细胞癌组织表达显著高于癌旁组织与正常组织（p0.05），相关性分析发现两者明显呈正相关（p0.05），LSD1与VEGF表达在高分化癌低于中分化及低分化癌，无淋巴结转移者显著低于有有淋巴结转移者，临床分期越高，两者表达越强。 结论 检测NSCLC中组织LSD1与VEGF的表达能够预测肿瘤的恶性程度及浸润转移能力LSD1基因可能是NSCLC一个有效的治疗靶点。 　　【关键词】LSD1，VEGF，非小细胞肺癌 　　【中图分类号】R-1 【文献标识码】B 【文章编号】1671-8801（2014）12-0250-02 　　肺癌是全球癌症死亡的首要原因，非小细胞肺癌（NSCLC）是肺癌最常见的类型，为了更好地治疗，进一步深入理解其发病的分子机制显得尤为重要。组蛋白甲基化酶及去甲基化酶的甲基化状态在关键基因的调控中起着重要作用。本研究中，我们通过分析60例非小细胞肺癌组织、15例瘤旁组织、及7例正常肺组织中LSD1与血管内皮生长因子（VEGF）的表达情况，分析LSD1与VEGF的表达及临床病理因素之间的关系，报道如下。 　　1材料与方法 　　1.1材料及各种试剂 　　1.1.1组织及临床资料 取我市收集的2003年1月至2013年12月非小细胞肺癌手术存档标本蜡块60例，男41例，女19例，年龄以30～78岁，平均年龄46岁，参照 IASLC推荐的新版NSCLC临床分期标准分期如下：I期27例，Ⅱ期17例，Ⅲ期9例，Ⅳ期7例。根据病理组织类型将非小细胞肺癌分为鳞癌39例和腺癌21例。瘤体直径≥3cm 45例，瘤体直径3cm15例。术中确认已经发生淋巴结转移的27例，所有患者术前都没有经历放疗、化疗及免疫治疗，并最终经病理学证明。其中15例含有相对应的癌旁组织，另外取7例非肿瘤性肺外疾病死亡的患者，尸检正常的肺组织作为正常对照。所有的标本均在手术中进行无菌取材，后经液氮进一步处理，然后放入-80℃冰箱保存。 　　1.1.2主要试剂 免疫组化试剂：抗LSD1抗体：兔抗人多克隆抗体浓缩型（美国达沃斯生物技术公司）；VEGF抗体：兔抗人多克隆抗体即用型（购自武汉三鹰生物技术公司）。免疫组织化学PV-9000试剂盒和DAB显色剂均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。 　　1.2实验方法 　　1.2.1免疫组织化学染色及结果分析 标本取材解冻后采用10%甲醛固定，石蜡包埋，常规连续5um切片。每例标本随机留取5片用以实验分析。采用SP染色法，二抗采用通用型。石蜡切片厚约5um，操作步骤严格按照说明书进行，抗LSD1抗体的稀释浓度1：100，VEGF抗体稀释浓度为1：100，用已知阳性切片作阳性对照，用磷酸盐缓冲液（PBS）代替一抗作阴性对照。选用OlympusBh2研究显微镜，在镜下观察LSD1和VEGF蛋白的表达，VEGF以细胞质染成棕黄色为阳性细胞，LSD1以细胞核染成棕黄色为阳性细胞，选择染色较好（阳性细胞染色清晰，背景干净）的组织切片，在高倍显微镜镜下（×400）随机选择5个视野，每个高倍视野观察细胞数在1000个以上，以染色细胞数10%为染色阴性，而染色细胞数大于10%为表达阳性。 　　1.3 统计学处理 　　采用spssl3.0软件进行数据分析，应用卡方检验进行率的比较，相关性采用pearson相关性分析， p0.05视为差异具有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1LSD1与VEGF在组织中的表达情况 NSCLC组织中LSD1主要定位于癌细胞核，呈现明显的棕黄色颗粒，而VEGF主要定位于癌细胞胞浆，也呈明显的棕色颗粒（图1），NSCLC组织中LSD1与VEGF的阳性细胞表达率分别为78.3%（47/60）、71.7%（43/60），癌旁组织中LSD1与VEGF的阳性细胞表达率分别为7%（1/15）、20%（3/15），正常肺组织中LSD1与VEGF的阳性细胞表达率分别为0（0/7）、14%（1/7），NSCLC组织中LSD1与VEGF的阳性细胞表达率明显高于癌旁组织及正常肺组织，三者比较差异有统计学意义（p0.05），而LSD1蛋白表达与VEGF蛋白表达相关性分析发现两者明显呈正相关（Rs=0.578，p0.05）。 　　2.2LSD1与VEGF在组织中的的表达与临床病理特征的关系 　　详见表1. 　　图1