血管紧张素转化酶基因ACE多态性和缺血性脑卒中中医证候相关性分析.docVIP

血管紧张素转化酶基因ACE多态性和缺血性脑卒中中医证候相关性分析 　　摘要 目的：探讨血管紧张素转化酶基因ACE（I/D）多态性与缺血性脑卒中患病及中医证候的关系。方法：应用聚合酶链反应(PCR)筛查382例脑梗死患者和200例健康对照组的血管紧张素转化酶基因ACE（I/D）多态性分布,探讨不同基因型与缺血性脑卒中患病及不同中医证候的关系。结果：脑梗死组DD、DI、II基因型分别为167、93、122例;健康对照组分别为42、75、83例;脑梗死组DD基因型显著高于健康对照组(χ2=4.42，P2=4.37,P2=4.71,P2=6.71、5.17，P0.01）。结论：ACE-DD基因型或D等位基因是脑梗死的遗传易感因素，可能在脑梗死发生中起作用。ACE-DD基因型或D等位基因与脑梗死肝阳暴亢、风火上扰证密切相关，可能是该证候的遗传易感因素。脑梗死组患者DD基因型患者血浆血管紧张素AngⅡ水平显著增高，且肝阳暴亢、风火上扰证患者增高更显著。DD基因型导致血浆AngⅡ水平增高可能是中医肝阳暴亢、风火上扰证诊断的遗传易感因素。 　　关键词 脑卒中 缺血性 中医证候 血管紧张素转化酶 基因多态性 　　 　　肾素―血管紧张素系统是参与体内血压调节的重要系统，而血管紧张素转化酶（ACE）是该系统中的关键酶之一。ACE基因的遗传变异影响体内ACE水平，国内外学者对ACE基因多态性与高血压、脑梗死三者间的关系进行了深入研究，结果却差异较大。为进一步探讨ACE基因在脑梗死发生发展中的遗传机制，对脑梗死患者ACE基因插入/缺失多态性与血浆血管紧张素(angiotensin，Ang)水平以及与缺血性中风中医证候相关性的关系进行分析，我们利用聚合酶链反应（PCR）技术对武汉地区382例缺血性脑卒中患者及200例健康对照人群的ACE基因I/D多态性进行了检测和分析。 　　 　　1 资料与方法 　　 　　1.1 研究对象：在湖北省中医院神经内科、武汉市第一医院神经内科、武汉大学附属中南医院共收集符合纳入标准脑梗死患者382例；健康对照组200例。脑梗死组：男性206例，女性176例；平均年龄为67.8岁±13.1岁，40～49岁46例，50～59岁89例，60～69岁137例，70～79岁110例；病史中有高血压病者219例，风湿性心脏病者34例，冠心病者98例，糖尿病者113例，高脂血症206例，吸烟者134例，饮酒者78例，有脑血管病高危因素家族史261例；中医证候分类：风痰瘀血、痹阻脉络证237例,肝阳暴亢、风火上扰证145例。健康对照组：男性107例，女性93例；平均年龄为63.7岁±14.5岁，40～49岁24例，50～59岁58例，60～69岁87例，70～79岁31例；病史中无高血压、冠心病、脑梗死等心脑血管疾病，身体各系统未发现重大疾病，吸烟者51例，饮酒者37例，有脑血管病高危因素家族史84例。 　　1.2 方法：分述如下。 　　1.2.1 基因PCR-RFLP分析：①基因组DNA应用DNA提取试剂盒从人血白细胞中提取。②参照文献［1］设计引物。PCR核苷酸引物P1:5-CTGGAGACCACTCCCATCCTTTCT3，P2:5-GATGTGGCCATCACATTCGTCAGAT-3’。引物合成由上海生工工程技术服务有限公司完成。③目的DNA片段PCR扩增：PCR反应体系为50ul,常规配制,置于PCR扩增仪，94℃预变性5min，94℃变性1min，58℃退火1min，72℃延伸2min，循环35周期，72℃延伸10min后终止扩增。循环完毕，取出反应物。PCR产物在含0.5g/L溴化乙锭的12.0g/L琼脂糖凝胶内电泳,通过凝胶成像系统判定结果。剩余扩增产物置于4℃冰箱保存。 　　1.2.2 统计学方法：两组间等位基因频率和基因型频率的比较采用χ2检验,两组间及组内计量资料的比较采用方差分析,P0.05为差异有显著性意义。 　　2 结果 　　2.1 基因型分布：血管紧张素转化酶基因型、等位基因频率分布PCR扩增出两种DNA片段,一种是490bp片段,称之为插入型(I型),另一种是190bp片段,称之为缺失型(D型),因此,在群体中可有DD、DI及II三种基因型。见图1。 　　 　　图1经琼脂糖凝胶电泳后的结果：1、2、5、8、9、10为II基因型,显示490bp电泳条带;4、7为DD基因型,显示190bp电泳条带;3、6为DI基因型,显示490bp、190bp两条电泳条带;M为DNA Marker。 　　2.2 脑梗死组及不同证型与健康对照组ACE I/D基因分型比较：见表1。 　　由表1可见，脑梗死组DD、DI、II基因型分别为167、93、122例;健康对照组分别为42、75、83例;脑梗