斑马鱼视网膜突变体的筛选与研究-发育生物学专业论文.docxVIP

山东大学博士毕业论文摘要： 山东大学博士毕业论文 摘要： 斑马鱼视网膜突变体的筛选与研究 斑马鱼因其胚胎透明、实验室养殖方便和发育速度快等特点，已 逐渐成为一种新的基础生物学研究的模型生物。 根据Rama Cajal所 说“视网膜是一种真正的神经核和一种外周脑”。它的显著特征是透 明、分层化、超薄以及细胞种类少。因而，利用视网膜开展神经生物 学的研究具有特别的优势，而斑马鱼的视网膜是开展有关研究非常方 便的材料。本研究筛选斑马鱼视网膜突交体，并对其进行了功能研究 和鉴定。论文研究主要包括两个方面的工作：分离并鉴定一种斑马鱼 的视网膜的夜盲突变体，开展了一些斑马鱼视网膜电生理学的功能研 究。本研究结果为神经生物学和发育生物学提供了新资料。 1．利用一种简单的行为学方法一一逃避反应，分离到一种斑马鱼 视网膜夜盲显性突变体nbc。与野生型相比，这种突变体的视觉敏感度 阈值在18月龄升高。比较组织学的研究发现，nbc突变体的视网膜的 形态变化很大：有些和野生型完全没有区别，有些视网膜的视杆和视 锥细胞萎缩，还有一些是在部分区域发生退形性变，在个别突变体的 视网膜中，整个感光细胞层发生坏死。采用透射电子显微镜观察，发 现一些突变体的视杆细胞明显小於野生型。利用免疫组织化学的方法 检测新生的细胞，与野生型比较，突变型没有很明显的区别。个别突 变体新生的细胞增多，并且这种细胞再生在内核层和外核层都存在。 用电生理的方法(整体视网膜电图)检测视网膜的功能，发现突变体与 山东大学博士毕业论文野生型也没有很明显的区别。 山东大学博士毕业论文 野生型也没有很明显的区别。 通过自交杂合体可以获得纯合突变体。纯合突变体是胚胎致死的， 并且发育不正常。在5d龄的纯合突变体中可以很明显的看到一些鱼缥 的畸形。这说明这种突变体并不是视网膜的特异性突变。通过比较纯 合突变体的数目和野生型以及杂合型的数目，发现nbc符合经典的孟 德尔遗传定律。这说明nbc可能是单基因突变。应用免疫组织化学的 方法比较幼体斑马鱼的视网膜的发育，发现在5d龄的斑马鱼中，视锥 细胞和视杆细胞的发育在野生型、杂含型和纯合型是相同的。这可能 暗示nbc是一种视网膜中迟激活的基因，它的功能可能不仅在视网膜 中，也有可能在其他的组织有功能。综上所述，我们通过分离和鉴定 了一种斑马鱼夜盲表型的突变体nbc，发现该突变体是迟发和渐进的。 视锥细胞和视杆细胞都发生退形性变，并且这种视觉感光细胞的变化 的表型不是视阏膜特异性的。 2．在低等脊椎动物中，长期以来人们一直认为视觉信号的传递通 过混合的双极细胞。通过记录视网膜电图的方法，我们研究了视杆和 视椎信号在斑马鱼的视网膜中的转换，发现在暗适应的过程中，视网 膜电图的b波和d波强度反应曲线都发生偏移。b波的偏移体现了一个 典型的浦肯野式偏移。它的灵敏度升高。与之相对的是，d波的灵敏度 降低．暗适应是一个从视锥细胞转到视杆细胞接受和传递信号的过程， 这个结果可能说明，d波可能是斑马鱼中由视锥细胞控制，而b波在暗 适应的早期由视杆细胞和视锥细胞控制，而在暗适应的晚期由视杆细 胞控制。 2 d】东大学博士毕业论文总之，本研究的创新之处在于成功分离了一种模型生物斑马鱼的 d】东大学博士毕业论文 总之，本研究的创新之处在于成功分离了一种模型生物斑马鱼的 视网膜夜盲突变体，并利用不同的方法研究这种突变体的生物学特征- 关键词：视网膜，突变体，nbc，筛选，鉴定，功能，斑马鱼 3 山东大学博士毕业论文符号说明 山东大学博士毕业论文 符号说明 英文缩写 英文全名 RP rettnitis Pigmentosa dpf days post fertilization ENU N-ethyl-N·nitrosourea PCNA proliferating cell nuclear antigen TBS Tri S buffered SaIIne ROS rod outer segment ERG 引ectroretinogram CoS cone outer segment ROS rod outer segment oNL outer nHelear layer RPE retinal pigment epitheliam APB 2-amino·4·phosphonobutyric acid oKR Optokinetic Respon se oMR optomoto r respon se 4 山东夫学博士毕业论文Chapte 山东夫学博士毕业论文 Chapte 1： A STUDY ON night blind c(nbc)MUTANT ZEBRAFISH 1．1 Abstract We describe here the mo rphological a