头孢卡品酯胶囊微生物限度检查的方法验证试验的研究.docVIP

头孢卡品酯胶囊微生物限度检查的方法验证试验的研究 　　[摘要] 按照《中国药典》2005年版二部微生物限度检查方法进行验证试验,建立头孢卡品酯胶囊微生物限度检查方法。该药的细菌计数方法为薄膜过滤法;霉菌及酵母菌计数方法为平皿法;控制菌(大肠埃希菌)计数方法为薄膜过滤法和培养基稀释法。 　　[关键词] 头孢卡品酯胶囊; 薄膜过滤法; 平皿法; 培养基稀释法 　　[中图分类号] R978.1+1 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701(2010)13-86-02 　　 　　头孢卡品酯胶囊是由头孢卡品酯和辅料组成的胶囊剂,为第四代口服头孢类抗生素。具有广谱抗菌活性,对耐青霉素(含中等程度耐药)的肺炎链球菌的活性很强,对很多耐抗生素的病原菌均有良好疗效。 　　由于该药具有很强的抗菌作用,需要通过验证来建立它的微生物限度检查方法。 　　本试验用2005年版中国药典规定的3株细菌(大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌)、2株真菌(黑曲霉、白色念珠菌)[1]对三批头孢卡品酯胶囊进行了微生物限度检查法的验证试验,以确认所采用的方法是否适合于该药品的细菌、霉菌、酵母菌数的测定和控制菌检查及检查药品本身污染微生物的状况,结果报道如下。 　　1 实验材料 　　1.1 仪器 　　HTY-2000A型集菌仪、泵管FPY330型(批、HTY-K型培养器专用震荡仪、HTY反复使用集菌培养器(杭州泰林生物技术设备有限公司);LRH-250生化培养箱(上海索普仪器有限公司)。 　　1.2 试药 　　营养琼脂培养基(批号071129)、营养肉汤培养基(批号071119)、玫瑰红钠琼脂培养基(批号071217)、BL培养基(批号071210)、MUG培养基(批号080716)北京三药科技开发公司;靛基质试验欧-波试液(批号080730)江苏宜兴永信生物有限公司;0.9%无菌氯化钠溶液、pH 7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液(扬子江药业集团有限公司输液车间配制)。 　　1.3 菌种 　　大肠埃希菌[CMCC(B)44102];金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003];枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63501];黑曲霉[CMCC(F)98003];白色念珠菌[CMCC(F)98001]均由中国药品生物制品检定所提供。 　　2 方法 　　2.1 菌液制备[2] 　　分别接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中在30～35℃中培养18～24h;接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中在23～28℃中培养24～48h,上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液稀释成含菌数为(50～100)cfu/mL的菌悬液;另外接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂培养基中,在23～28℃中培养5d,加入5mL 0.9%无菌氯化钠溶液,将孢子洗脱后,用0.9%无菌氯化钠溶液稀释成含孢子数为(50～100)cfu/mL的菌悬液,备用。 　　2.2 供试液制备 　　供试液:取供试品5g,加入已灭菌的吐温80约5mL,慢慢加入45℃的pH 7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100mL,边加边搅拌,保温振摇使混匀,静置后的上清液作为1∶20的供试液。 　　稀释剂对照液:分别取灭菌的吐温80约5mL,分别加入约5000～10000CFU的菌悬液,慢慢加入45℃的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100mL,边加边搅拌,使混匀,作为含菌量(50～100)cfu/mL的稀释剂对照液。 　　各试验菌分别制备一份。 　　2.3 细菌、霉菌及酵母菌常规法计数方法 　　2.3.1 试验组 取 1∶20 的供试液2mL,每1毫升供试液和(50～100)cfu/mL试验菌同时加入平皿中,立即倾注相应规定的培养基,每株试验菌平行制备2个平皿,按平皿法测定菌落数。 　　2.3.2 菌液组 分别取各备用试验菌,加入与试验组等量菌液,测定每一菌株所加的试验菌数。 　　2.3.3 供试品对照组 方法同试验组,不加试验菌,测定供试品的本底菌数。 　　2.3.4 稀释剂对照组 取稀释剂对照液代替供试品,按试验组的方法操作,以考察供试液制备过程中微生物受影响的程度。 　　2.3.5 菌回收率计算 试验组回收率=(试验组的平均菌落数-供试品对照组的平均菌落数)/(菌液组的平均菌落数)×100%;稀释剂对照组回收率=(稀释剂对照组的平均菌落数-供试品对照组的平均菌落数)/(菌液组的平均菌落数)×100%。 　　2.4 细菌薄膜过滤法计数方法 　　2.4.1 试验组 取供试液1mL,至含有pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液约100mL的滤筒内,振摇过滤,用45℃ pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液振荡冲洗,每次5