基于BTLA及调节T细胞的探讨294例风湿病患者血小板病变机制.docVIP

基于BTLA及调节T细胞的探讨294例风湿病患者血小板病变机制 　　【摘 要】目的：探讨B、T淋巴细胞衰减因子（BTLA）和调节性T细胞（Treg）在风湿病患者血小板病变中的作用机制。方法：选取294例风湿病患者，包括类风湿关节炎116例、强直性脊柱炎60例、干燥综合征56例、骨关节炎62例，采用流式细胞术检测患者外周血BTLA、Treg表达，采用生化仪检测风湿病患者血小板参数及实验室指标，观察风湿病患者血小板参数变化及与BTLA、Treg等实验室指标的关系。结果：①与正常组比较，风湿病患者血小板异常率最高为类风湿关节炎，其次为强直性脊柱炎、干燥综合征、骨关节炎；②与正常人群比较，风湿病患者外周血BTLA、Treg表达降低（P 0.05）；与风湿病BTLA、Treg正常组比较，BTLA、Treg异常组血小板参数血小板计数（PLT）、血小板压积（PCT）、血小板分布宽度（PDW）升高 （P 0.05或P 0.01）；③相关分析显示：PLT、MPV与CD3+BTLA+Tcell 　　呈正相关，PCT、PDW与CD4+BTLA+T cell、CD8+BTLA+T cell呈负相关，PLT与Treg、C3、红细胞沉降率（ESR）、hs-CRP呈正相关，MPV与IgG、ESR呈正相关，PDW与hs-CRP呈正相关 （P 0.05或 　　P 0.01）。 结论： BTLA、Treg表达失衡，促使T细胞、B细胞过度异常活化，导致炎症因子失衡，造成血液系统的损害，从而出现RA血小板异常。 　　【关键词】 血小板；风湿病；B、T淋巴细胞衰减因子；调节性T细胞；临床研究 　　血小板由骨髓造血组织中的巨核细胞产生，主要功能是凝血和止血，修补破损的血管。血小板的表面糖衣能吸附血浆蛋白和凝血因子Ⅲ，血小板颗粒内含有与凝血有关的物质。近年研究发现，血小板不仅具有凝血和止血功能，而且参与了人体内的炎症和免疫反应[1]。风湿病为慢性免疫性炎症性疾病，发病机制尚不完全明确，活动期存在血小板计数反应性增高。有研究发现，风湿病的发生与免疫功能紊乱关系密切，其中，B、T淋巴细胞衰减因子（B and T lymphocyte attenuator，BTLA）和调节性T细胞（Regulatory T cells，Treg）在风湿病的发病中起重要调节作用[2-3]。为研究血小板在风湿病中发病的意义，现观察294例患者血小板及BTLA的变化，以探讨其作用机制。 　　1 资料与方法 　　1.1 一般资料 选取2011年9月至2013年5月在安徽中医药大学第一附属医院就诊的门诊及住院风湿病患者294例，包括类风湿关节炎（RA）116例，干燥综合征（SS）56例，骨关节炎（OA）62例和强直性脊柱炎（AS）60例。其中男197例，女97例；年龄18～70岁，平均（48.87±12.15）岁；病程0.3～30年，平均（15.63±6.09）年。另设正常人群46例为正常对照组，男20例，女26例；年龄22～64岁，平均（39.04±10.47）岁。所有患者均符合1987年美国风湿病学会（ACR）修订的诊断标准[4-7]。 　　1.2 主要仪器和试剂 日本Sysmex XT-2000i全自动血细胞分析仪，日立7060型全自动生化分析仪，美国产Beckman-Coulter XL-ESPIC MCL型流式细胞仪。藻红蛋白（PE）标记的BTLA 试剂盒、异硫氢酸荧光素（FITC）标记的鼠抗人CD4单抗、PE标记的鼠抗人CD25单抗、藻红蛋白-青色素染料5 （PE-Cy5）标记的鼠抗人CD127单抗试剂盒、相应同型对照抗体为FITC/PE/PE-Cy5标记的小鼠IgG1、溶血素均购自美国贝克曼（Beckman Coulter）公司。RF、SOD、IgG、IgA、IgM、C3、C4试剂盒及其配套试剂购自美国凯通（Cortez）公司；CRP、ESR试剂盒均由美国德灵（Dade Behring）公司提供。 　　1.3 观察指标及方法 实验室指标：BTLA、Treg、 　　PLT、PCT、MPV、PDW、RF、SOD、IgG、IgA、IgM、C3、C4。 　　BTLA测定：分别于清晨采集风湿病患者外周静脉血2 mL（肝素抗凝）；取全血100μL加入BTLA 10 μL，室温避光反应30 min；加2 mL溶血剂在室温下溶解红细胞10 min；PBS洗涤，离心 　　5 min（1 500 r?min-1），弃上清液；每份标本加入质量浓度0.1%多聚甲醛500 μL后用流式细胞仪检测BTLA占淋巴细胞（LC）百分比。Treg测定：取全血100 μL加入小鼠抗人CD4 10 μL、CD25 5 μL、CD127 10 μL，室温避光反应30 min；加2 mL溶血剂在室