褐藻胶裂解酶基因的克隆表达与酶学性质-微生物学报.PDF

1178 生 物 工 程 学 报 高洁 等/褐藻胶裂解酶基因的克隆表达与酶学性质 Chinese Journal of Biotechnology /cjbcn Jul. 25, 2018, 34(7): 1178−1188 DOI: 10.13345/j.cjb.180027 ©2018 Chin J Biotech, All rights reserved ·研究报告· 高洁，李益民，杜聪，裴绪泽，卢慧敏，赵孝阳，袁文杰 大连理工大学 生命科学与技术学院，辽宁 大连 116024 高洁, 李益民, 杜聪, 等. 褐藻胶裂解酶基因的克隆表达与酶学性质. 生物工程学报, 2018, 34(7): 1178–1188. Gao J, Li YM, Du C, et al. Cloning and expression of alginate lyase genes from Vibrio alginolyticus and characterization of the alginate lyase. Chin J Biotech, 2018, 34(7): 1178–1188. 摘 要: 随着大型褐藻生产燃料乙醇以及褐藻寡糖重大药用价值的发现，褐藻胶裂解酶成为国内外多个领域的研 究重点。文中对解藻酸弧菌上与褐藻胶降解相关的5 个基因分别进行克隆表达，通过SDS和酶活性定量测 定，发现该基因簇中的4 个基因有降解褐藻胶活性。对酶活最高的rAlgV3 进行了诱导条件的优化、酶蛋白纯化 4 5 及酶性质研究，发现优化诱导条件后重组酶rAlgV3 的酶活由2.34×10 U/L 上升为 1.68×10 U/L ，比优化前提高了 7.3 倍；对酶性质进行表征发现该酶在4–70 ℃均有活性，最适反应温度为40 ℃，在4–20 ℃酶相对稳定；该酶在 pH 6.5−9.0 环境下均有较高的酶活，最适pH 为8.0；pH 稳定性好，在pH 4.5–9.5 环境下可以稳定存在；适量的 NaCl 浓度和Fe2+ 、Fe3+等离子具有促进酶活的作用，SDS 和Cu2+ 离子可明显抑制酶活力。对该酶的底物特性的研 究发现，该酶不仅可以降解褐藻胶中的Poly-M 片段，也能降解Poly-G 片段，具有广泛底物特性；其降解海藻酸 钠主要释放二糖和三糖，是一种内切酶。该酶对于第三代燃料乙醇的发展及褐藻寡糖的生产具有重要作用。 : 褐藻胶裂解酶，解藻酸弧菌，克隆表达，酶性质，燃料乙醇 Cloning and expression of alginate lyase genes from Vibrio alginolyticus and characterization of the alginate lyase Jie Gao, Yimin Li, Cong Du, Xuze Pei, Huimin Lu, Xiaoyang Zhao, and Wenjie Yuan School of Life Science and Biotechnology, Dalian University of Technology , Dalian 116024, Liaoning, China Abstract: With the discovery of the significant medicinal v