超声辐照微泡介导EPC归巢至大鼠移植腹主动脉的实验研究-影像医学与核医学专业论文.docxVIP

超声辐照微泡介导EPC归巢至大鼠移植腹主动脉的实验研究-影像医学与核医学专业论文.docx

  1. 1、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。。
  2. 2、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载
  3. 3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
  4. 4、该文档为VIP文档,如果想要下载,成为VIP会员后,下载免费。
  5. 5、成为VIP后,下载本文档将扣除1次下载权益。下载后,不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们
  6. 6、成为VIP后,您将拥有八大权益,权益包括:VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
  7. 7、VIP文档为合作方或网友上传,每下载1次, 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等,对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多
超声辐照微泡介导EPC归巢至大鼠移植腹主动脉的实验研究-影像医学与核医学专业论文

万方数据 万方数据 独 创 性 声 明 本人郑重声明:所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工 作及取得研究成果。尽我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方 外,论文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果,也不包含为获得 宁波大学或其他教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作 的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明并表示了 谢意。 若有不实之处,本人愿意承担相关法律责任。 签名: 日期: 关于论文使用授权的声明 本人完全了解宁波大学有关保留、使用学位论文的规定,即:学校 有权保留送交论文的复印件,允许论文被查阅和借阅;学校可以公布论 文的全部或部分内容,可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。 (保密的论文在解密后应遵循此规定) 签名: 导师签名: 日期: 宁波大学硕士学位论文 超声辐照微泡介导 EPC 归巢至大鼠移植腹主动脉的实验研究 摘 要 目的: 探讨采用超声辐照微泡介导内皮祖细胞(Endothelial progenitor cell, EPC)移植归巢至大鼠 移植腹主动脉的可行性及有效性,为研究干细胞治疗慢性移植物血管病奠定前期实验基 础。 方法: 选取 10 只重量在 250-300 g 之间的 Lewis 大鼠用于 EPC 的提取。无菌操作下提取大鼠的股 骨与胫骨、采用 M199 培养基将股骨与胫骨内的骨髓液冲出、密度梯度离心法分离得到大 鼠骨髓单个核细胞(mononuclear cells,MNC)。将 MNC 种植于纤维连接蛋白包被的培养 瓶内,加入大鼠血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)和人碱性成 纤维细胞生长因子(Human basic fibroblast growth factor, bFGF)诱导其分化成 EPC。采用 形态观察法、免疫荧光法及摄取 Dil 标记的乙酰化低密度脂蛋白(Acetyl low density lipoprotein, acLDL)与结合 FITC 标记的荆豆凝集素 1(Ulex europaeus agglutinin, UEA-1) 法确定 EPC。将含有绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因的慢病毒在 293T 细胞中进行大量扩增,构建获得由慢病毒介导的转入 GFP 基因的 EPC 细胞株,将转入报 告基因的 EPC 培养 24、48 和 72 h 之后,分别置于倒置荧光显微镜下观察细胞内 GFP 的 表达情况。建立大鼠腹主动脉移植模型并对其进行评价,将 30 只异系大鼠腹主动脉移植 模型随机分成 5 组(Ⅰ:对照组;Ⅱ:超声+微泡组;Ⅲ:单纯 EPC 组;Ⅳ:超声+EPC 组;Ⅴ:超声+微泡+EPC 组)。Ⅰ组输入生理盐水作为对照;Ⅱ组输入微泡溶液并采用超 声辐照;Ⅲ组输入生理盐水;Ⅳ组输入生理盐水并采用超声辐照;Ⅴ组输入微泡溶液并采 用超声辐照。上述方法处理结束后,Ⅰ组和Ⅱ组输入生理盐水,Ⅲ组、Ⅳ组和Ⅴ组注射输 入 GFP 标记的 EPC。处理 72 h 后处死所有的大鼠,置于荧光显微镜下观察血管内 GFP 的 表达情况。 结果: ① 光学显微镜下观察:培养过程中的细胞可呈短梭形、圆形和纺锤形等形态;荧光显微 镜下观察:细胞 CD133 和 VEGFR2 表面抗原的表达均为阳性;激光共聚焦显微镜下观 察:MNC 在培养 8 d 时可以同时摄取 Dil-AC-LDL 与 FITC-UEA-1。以上鉴定结果表明 MNC 已分化成 EPC。②慢病毒感染内皮祖细胞 24 h 后,即可看到细胞内有少量的 GFP; I 超声辐照微泡介导 EPC 归巢至大鼠移植腹主动脉的实验研究 48 h 后,GFP 逐渐增多;72 h 后,可见所有的细胞内均呈现绿色荧光。③倒置荧光显微镜 下观察到上述处理的Ⅰ组和Ⅱ组大鼠移植腹主动脉内未发现绿色荧光,Ⅲ组、Ⅳ组、和Ⅴ 组大鼠移植腹主动脉内可见绿色荧光,而其中Ⅴ组中绿色荧光的强度显著高于另外两组。 结论: 上述实验结果表明:大鼠 MNC 在 VEGF 和 bFGF 的诱导下可分化成 EPC;带有 GFP 基因 的慢病毒可以有效地感染 EPC,使其成功地表达 GFP,且未对细胞活性造成明显影响;我 们建立的经超声辐照微泡介导 EPC 移植归巢至大鼠移植腹主动脉的方法可行性高且效果明 显,可作为一种新的技术手段应用于干细胞靶向治疗慢性移植物血管病临床领域的研究。 关键词:超声, HYPERLINK /ChemicalProductProperty_CN_CB7738335.htm 微泡,内皮祖细胞,腹主动脉移植模型,归巢 II 宁波大学硕士学位论文 Experimental Study of

您可能关注的文档

文档评论(0)

peili2018 + 关注
实名认证
文档贡献者

该用户很懒,什么也没介绍

1亿VIP精品文档

相关文档