常见妇科肿瘤血清中糖蛋白标志物的筛选分析-药物分析学专业论文.docxVIP

安徽医 安徽医科大学硕士学位论文 4 4 3.3 本章小结 26 结论 27 参考文献 28 附表 32 附录 36 致谢 37 综述及参考文献 38 PAGE PAGE 1 常见妇科肿瘤血清中糖蛋白标志物的筛选分析 中文摘要 目前，临床上针对乳腺癌、宫颈癌、卵巢癌等常见妇科恶性肿瘤疾病的血清 标志物主要是 CA153、CEA、CA125 等，但在对这些肿瘤标志物的实际临床检 测当中，发现基于这些标志物蛋白表达水平所呈现出的肿瘤阳性检出率以及特异 性并不理想，用于肿瘤诊断的价值有限。寻找新的诊断标志物成为肿瘤研究领域 的热点之一，研究表明，蛋白质的糖基化修饰与肿瘤的发生和发展密切相关。本 研究的目的就是要建立一种可通量化地筛选与鉴定血清中与妇科肿瘤疾病相关 的糖蛋白的研究策略，为肿瘤的诊断标志物以及肿瘤形成机制研究奠定基础。 针对岩藻糖、唾液酸、甘露糖、N-乙酰半乳糖胺和 N-乙酰葡萄糖胺等 5 种 常见的聚糖结构类型，本研究共选用了 15 种凝集素（AAL、LCA、MALⅡ、SNA、 ConA、WGA、DBA、SBA、PNA、VVL、DSL、SJA、UEAⅠ、GSLⅡ、LEL） 并制成凝集素芯片，通过对标记的 123 例（健康对照组 49 例、乳腺癌组 31 例、 宫颈癌组 24 例、卵巢癌组 19 例）临床血清样本的检测，获得全部血清样本的聚 糖结构信息。经过与健康对照组检测结果的比较分析，筛选出一些在肿瘤样本组 中存在统计学差异的聚糖结构信息，其中响应信号较强的有：SNA（唾液酸）＞ ConA（甘露糖）＞LCA（甘露糖）＞UEA I（岩藻糖），本研究最终选用检测信 号最强的 SNA 凝集素来富集血清样本中的唾液酸化蛋白，并用于后续唾液酸化 蛋白标志物的筛选与鉴定。 考虑到血清中高丰度蛋白的存在会对低丰度蛋白的质谱鉴定与定量检测产 生严重干扰，在本研究中我们采取了先选择性地去除血清样本中两种高丰度蛋白 IgG 和白蛋白，再用 SNA 凝集素来选择性地富集唾液酸化糖蛋白，最后联合 iTRAQ 定量标记、HPLC 预分离和 Nano LC-MS/MS 色谱及串联质谱等技术实现 对蛋白定量分析与鉴定的研究策略，通过对乳腺癌、宫颈癌、卵巢癌和健康对照 组血清样本中的唾液酸化蛋白质组的定量检测分析，共鉴定到 169 个蛋白质。通 过与已有文献报道的研究结果相比较，可以看出本研究鉴定出的差异表达蛋白基 本都是正确的，这进一步地验证了本研究所建立的用于筛选疾病组血清糖蛋白标 志物的研究策略是可行的。通过与健康对照组样本检测结果的比较分析，在乳腺 癌组发现 30 个差异表达蛋白、宫颈癌组发现 22 个差异表达蛋白、卵巢癌组发现 30 个差异蛋白。而且在不同疾病组间，这些差异蛋白在血清中的表达情况既有 着相同的表达规律，又存在着疾病特异性的表达情况，为进一步探求肿瘤疾病的 发生机制以及筛选具有肿瘤特异性的标志物奠定了基础。 关键词：定量蛋白质组学/唾液酸化糖蛋白/妇科肿瘤/血清标志物/质谱 Discovery and identification of serum glycoproteins biomarkers for common gynecological tumors Abstract Currently, carcinoembryonic antigen, cancer antigen 125 and cancer antigen 15-3 are the biomarkers often used for the diagnostic of common gynecological tumors (breast cancer, cervical cancer, ovarian cancer), but the diagnostic value based on the protein marker profiles was limited. The alteration in protein glycosylation have been shown to correlate with the development and progression of cancer and other disease states. Thus, the object in this work is to develope a strategy for discovery and identification of serum glycoproteins correlated with gynecological tumors, and provide biologically meaningful data for the