蝉花发酵生产免疫活性组分ISP的研究生物制药工程专业论文.docxVIP

重庆大 重庆大学硕士学位论文 英文摘要 PAGE PAGE VI compared with that in control medium. Keywords: Cordyceps cicadae, ISP, Submerged Cultivation, Separation, Content Determination 重庆大 重庆大学硕士学位论文 目录 目 录 中文摘要I 英文摘要 2 1 绪 论 1 1.1 蕈菌 1 1.1.1 概述 1 1.1.2 蕈菌发酵培养 1 1.2 蝉花的研究概况 2 1.2.1 蝉花背景资料简介 2 1.2.2 历史文献中关于蝉花的记载 3 1.2.3 蝉花的化学成分 3 1.2.4 蝉花的药理作用 3 1.3 免疫抑制剂简介及其发展应用 4 HYPERLINK \l _TOC_250003 1.4 ISP 的研究概况 5 1.5 课题的提出与研究意义 6 1.6 课题研究内容与技术路线 8 HYPERLINK \l _TOC_250002 1.6.1 ISP 分离纯化工艺研究 8 HYPERLINK \l _TOC_250001 1.6.2 ISP 含量测定的研究 8 1.6.3 培养基碳源、氮源和碳氮比的优化 8 1.7 课题的创新点 8 HYPERLINK \l _TOC_250000 2 大孔吸附树脂分离纯化蝉花中 ISP 10 2.1 大孔吸附树脂技术简介 10 2.1.1 大孔吸附树脂的特性及原理 10 2.1.2 分类及性能 11 2.1.3 大孔吸附树脂的预处理 11 2.1.4 解吸溶媒(洗脱剂)的选择 11 2.1.5 洗脱起始点和终点判断 11 2.2 仪器与试剂 12 2.2.1 仪器 12 2.2.2 材料 12 2.3 实验方法 12 2.3.1 蝉花的深层发酵培养 12 2.3.2 上柱样品制备 13 2.3.3 树脂的选择及其处理 13 2.3.4 解吸 14 2.3.5 薄层层析 15 2.3.6 ISP 的萃取 15 2.4 实验结果 15 2.4.1 确定乙醇洗脱浓度 15 2.4.2 用确定后的乙醇浓度梯度验证洗脱 17 2.4.3 ISP 的萃取 18 2.7 讨论 18 2.8 小结 19 3 HPLC-MS 联用检测蝉花中 ISP 20 3.1 仪器与试剂 20 3.1.1 仪器 20 3.1.2 试剂 20 3.2 实验方法 20 3.2.1 色谱条件 20 3.2.2 质谱条件 21 3.2.3 供试品溶液的制备 21 3.2.4 对照品溶液的配制 21 3.3 实验结果 21 3.3.1 HPLC 结果分析 21 3.3.2 质谱分析 22 3.4 小结 23 4 蝉花中 ISP 的含量测定 24 4.1 实验原理 24 4.1.1 紫外与可见光分光光度法测定原理 24 4.1.2 茚三酮比色法测定 ISP 含量原理 24 4.2 仪器与试剂 25 4.2.1 实验仪器 25 4.2.2 实验试剂及配制 25 4.3 实验方法 26 4.3.1 样品溶液制备 26 4.3.2 比色测定 26 4.3.3 薄层检测 26 4.4 实验结果 26 4.4.1 最大吸收波长的确定 26 4.4.2 反应温度和反应时间的确定 27 4.4.3 标准曲线的绘制 28 4.4.4 精密度和稳定性实验 28 4.4.5 重现性实验 28 4.4.6 回收率实验 28 4.4.7 样品测定分析 29 4.5 讨论 29 4.5.1 样品甲醇溶液稀释剂的选择 29 4.5.2 薄层层析结果分析 30 4.6 小结 31 5 液体培养蝉花生产 ISP 培养基碳源、氮源的优化 32 5.1 实验材料 33 5.1.1 试剂 33 5.1.2 仪器 33 5.1.3 菌种 33 5.2 实验方法 33 5.2.1 蝉花的深层发酵培养 33 5.2.2 细胞生长和 ISP 形成动力学 33 5.2.3 碳源种类的影响 34 5.2.4 氮源种类的影响 34 5.2.5 优化的培养基对 ISP 产量影响 34 5.3 分析方法 34 5.3.1 取样 34 5.3.2 细胞量 34 5.3.3 ISP 的分离纯化及含量测定 34 5.3.4 参数的计算 355 5.4 实验结果 35 5.4.1 细胞生长和 ISP 形成的动力学 35 5.4.2 碳源种类的影响 35 5.4.3 氮源种类的影响 37 5.4.4 优化的培养基对 ISP 产量的影响 378 V VII 5.5 小结