茶树扦插生根过程中主要生化物质变化及POD57基因克隆和表达特征分析-茶学专业论文.docxVIP

PAGE PAGE III internal transmembrane structure. The tissue specificity analysis showed that the gene mainly expressed in the root. 4. The expression level of POD57 was studied with qRT-PCR.The results showed that the expression level of POD57 in Camellia sinensis cv.“Wancha91”and Camellia sinensis cv. “Shuchazao” went through a process of “decrease-increase”,while that in Camellia sinensis cv.“Wancha91” kept increaseing. The hormone inhibt POD57 expression during the first twenty days,expressions of POD57 in all the three tea varieties went through a process of “decrease-increase”. The POD57expression level in Camellia sinensis cv.“Wancha91” was higher than the other two cultivars during all the time. Key words: Camellia sinensis, Exogenous hormones, Cuttings rooting, Physiological and biochemical, Gene cloning, qRT-PCR PAGE PAGE IV 目 录 摘 要 I ABSTRACT II 图表清单 VII 1 文 献 综 述 1 1.1 扦插生根影响因子研究 1 1.1.1 影响茶树扦插生根的内在因素1 1.1.2 影响茶树扦插生根的外在条件2 1.2 扦插生根的组织解剖学研究 3 1.3 扦插生根生理生化研究 3 1.3.1 碳水化合物4 1.3.2 酶活性 4 1.3.3 内源激素 5 1.3.4 酚类物质 5 1.4 扦插生根过程基因诱导和表达调控机理研究 6 1.4.1 扦插生根相关基因表达研究6 1.4.2 植物基因诱导表达与植物激素的关系 6 2 引言7 2.1 研究目的与意义7 2.2 研究内容和技术路线 7 2.2.1 研究内容 7 2.2.2 技术路线 8 3 材料与方法 9 3.1 试验材料 9 3.2 仪器与试剂 9 3.2.1 主要实验仪器9 PAGE PAGE VI 3.2.2 主要试剂 9 3.2.3 引物合成与测序10 3.3 试验方法 10 3.3.1 外源激素处理对茶树插穗生根的影响 10 3.3.2 生理生化指标测定 12 3.3.3 茶树 POD57 基因 cDNA 克隆及生根期间表达研究 14 4 结果与分析 20 4.1 茶树扦插成活率研究 20 4.1.1 大田苗圃扦插20 4.1.2 温室扦插 22 4.2 扦插生根过程中主要生理生化指标变化 23 4.2.1 含水率变化23 4.2.2 可溶性糖含量变化 24 4.2.3 淀粉含量变化25 4.2.4 可溶性蛋白含量变化 26 POD 活性变化 27 PPO 活性变化 28 IAAO 活性变化 28 4.2.8 茶多酚含量变化29 HYPERLINK \l _TOC_250000 4.3 RNA 的提取与质量检测 30 4.4 POD 57 的全长 CDNA 克隆与序列分析 30 POD 57 3’-RACE 克隆 30 POD 57 5’-RACE 克隆 31 POD57 cDNA 全长验证 31 4.4.4 POD57 编码的氨基酸序列分析 32 4.5 茶树 POD57 的表达特征分析 35 4.5.1 定量 PCR 标准曲线的确定 35 4.5.2 茶树 POD57