草鱼三个C1q相关基因的克隆及表达分析-动物遗传育种与繁殖专业论文.docxVIP

上海海洋大学硕士学位论文 上海海洋大学硕士学位论文 II II 2．BLAST分析发现，草鱼C1qB，C1qC和C1q-like都是较为保守的 蛋白家族成员，草鱼与斑马鱼的C1qB、C1qC氨基酸序列相似度最高， 分别达到67%、71%；草鱼C1q-like与斑马鱼C1qtnf5氨基酸序列相似度 最高；选取各自基因不同物种的氨基酸序列，通过MEGA 5.0软件，使 用NJ方法构建系统进化树，发现草鱼与其它硬骨鱼类的亲缘关系最近， 这些结果都支持了传统的进化理论，反应了其实际的亲缘关系。 3．多序列比对和蛋白功能结构域分析发现，C1qB、C1qC基因都 包含有三个保守的结构域：N-端信号肽，胶原结构域和C-端球状结构 域，且其氨基酸序列中与链间及链内的二硫键结合有关的四个半胱氨 酸位点一致，并在不同物种中高度保守。但他们的氨基酸序列一致度 并不高，表明他们的功能可能具有一定差异性。C1q-like基因具有与补 体C1q高度同源的C-端球状结构域和与TNF-α相似的THD结构域两大 C1q/TNF家族成员重要结构部分。 4．利用实时荧光定量PCR技术检测健康草鱼各组织及使用草鱼呼 肠孤病毒诱导后3个基因的表达谱，结果显示：3个基因在所有被检测 组织中均有表达，表明他们可能在草鱼体内发挥广泛的作用；3个基因 均在脾脏、中肾、头肾等免疫器官内呈现高表达，也体现了其在免疫 中起到重要作用。经诱导后，3个基因的大多数组织均出现了在显著上 调的现象，尤其是免疫相关组织多在感染早期出现上调后呈下降趋势， 此外，在皮、腮、肠等粘膜组织中也发现有参与免疫反应的迹象。分 析健康草鱼和病毒注射后草鱼体内3个基因的表达情况，表明草鱼呼肠 III III 孤病毒可以影响草鱼体内的C1q相关基因的表达情况，从而对机体产生 一定的影响。 5．为了解C1qB、C1qC和C1q-like基因对草鱼的胚胎发育所起到的 作用，通过实时荧光定量PCR技术对其进行检测显示：在卵子中均检 测到3个基因的表达，这表明他们可能遗传于母本；3个基因均在胚胎 发育早期及检测到表达，表明他们在胚胎发育过程中具有重要的作用。 其中草鱼C1qB与C1q-like基因的表达谱较为相似，在胚胎发育的早期具 有较高的表达量，表明他们可能参与到卵子发生、受精的过程中。 通过以上研究结果可见，3种基因均在免疫器官中的表达量较高， 且受到草鱼呼肠孤病毒诱导后表达量都出现显著变化，证明其参与到 草鱼免疫反应当中。3个基因在胚胎发育的早期就已存在，表明其在胚 胎发育过程中具有重要的功能。 关键词： 草鱼，C1q相关基因，草鱼呼肠孤病毒，荧光定量，免 疫器官 PAGE PAGE IV Cloning and Expression Analysis of Three C1q Genes from Ctenopharyngodon idella ABSTRACT Grass carp (Ctenopharyngodon idella) is one of the most impotant fresh aquaculture fishes in China and even the world’s, has a long history of farming. The diseases, especially the grass carp viral hemorrhagic, are serious problems in freshwater fish breeding process, which is a limiting factor to fresh water breeding. Up to date, the prevention of such infections is still very difficult, traditional methods have their limitations.Use of molecular for beeding can promote the sustainable development of freshwater aquaculture, so comprehensive in-depth study of the pathogen pathogenesis and fish immune-related genes. The complement system, as a representative of innate immunity, plays a key role in the host defense against infections. C1q is the member of complement classical