草鱼免疫细胞和免疫相关基因研究：自然杀伤细胞杀伤活性和溶菌酶mRNA的表达-动物营养与饲料学专业论文.docxVIP

上海海洋大学硕士学位论文 上海海洋大学硕士学位论文 3 3 血清和肝胰脏中溶菌酶呈现先升高后降低的趋势，血清碱性磷酸酶在饥饿 15 d、45 d、60 d 时显著低于对照组；饥饿组的碱性磷酸酶活性在饥饿 30 d 以后，维持恒定。 相比较而言，自然杀伤细胞的杀伤活性在反映鱼类免疫状况时比溶菌酶和碱性磷酸 酶可能更为灵敏。 总之，草鱼对体内贮能物质(蛋白质和脂肪)的动用并不是简单地与饥饿时间线 性相关，而是出现周期性和阶段性起伏的变化；同时饥饿降低了鱼类的非特异免疫 水平。 二、试验随机选取平均体质量为（6.93±0.27) g 的草鱼，设置为 5 个试验组（D1、 D2、D3、D4、D5），每个试验组 5 个平行，分别饲喂添加溶菌酶制品 0，100，200， 300 和 400 mg/kg 的试验饲料。于试验进行 30 d、45 d、60 d 时采集头肾、脾、肠、 肝胰脏，测定三个阶段下，饲用溶菌酶对草鱼生长指标、NK 细胞杀伤活性、溶菌 酶活性、c 型和 g 型溶菌酶 mRNA 的相对表达量的影响。 1、随着溶菌酶添加量的增加，特定生长率并未呈现显著性增加的趋势，在饲 喂 60 d 时，D2 和 D3 组与对照组无显著性的差异；在试验结束时 D3（200 mg/kg） 组饵料系数显著低于其它各试验组。 2、在饲喂 30 d 时 D3(200 mg/kg) NK 细胞头肾和脾中的杀伤活性显著高于对 照组；随着饲喂时间的增加，高剂量的溶菌酶添加组提高了草鱼 NK 细胞的杀伤活 性。饲喂 30 d 时，溶菌酶活性在高剂量的添加组活性显著高于对照组，在饲喂 45 d 时与 30 d 基本相同（头肾除外）；在饲喂 60 d 时随着添加量的增加呈现不变或降 低的趋势（头肾除外）。NK 细胞活性和溶菌酶活性与溶菌酶剂量、存在组织和作 用的时间相关。 3、饲用溶菌酶制品对內源溶菌酶基因表达的影响因所在组织、基因型、饲喂 时间的不同而不同；从基因型来说，g-type 溶菌酶的表达量升幅较大，变化呈现一 定的规律性，在实验结束时 400mg/kg 组有相对较高的表达量；c-type 溶菌酶的表 达水平在各阶段各组织差异较大。从作用组织来说，肝胰脏和肠的 g-type 溶菌酶 相对表达量升幅较小，头肾和脾较大；从饲喂时间来说，45 d 各基因组的表达量相 对较低。 4、在转录水平上，饲用溶菌酶制品刺激了内源溶菌酶 mRNA 的表达，在饲喂 30 d 时溶菌酶蛋白水平与 mRNA 的表达水平一致，其后两个阶段各组织差异较大， 出现了不同步的现象。 在该实验中，从草鱼生长、饲喂 30 dNK 细胞的杀伤活性和溶菌酶活性来看， 200mg/kg 是饲用溶菌酶较适宜的添加量。从饲喂 45 d、60 d 与 g 型溶菌酶的表达 水平和 NK 细胞杀伤活性来看，400mg/kg 组为溶菌酶的适宜添加量。 关键词：草鱼；饥饿；蛋白质代谢；脂肪代谢；自然杀伤细胞；溶菌酶；mRNA 时空表达 4 4 Research on Immune Cells and Immune Genes of Grass Carp: Natural Killer Cell Activities and the mRNA Expression of Lysozyme Genes ABSTRACT Abstract: Medication residual,environment and food safety confront the traditional measures in treatment of fish diseases. This research focused on the natural killer activities and the expressions of lysozyme genes in order to get acquainted with the function and the importance of the application of nutrition and feed additives-dietary lysozyme to enhance the immune response to infections, preventing and treating diseases and to explore the immunologic potency and immune-regulating mechanism of grass carp. The main contents of this paper were as follows. Starvation is a situation undergone and toler