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茶叶主要糖苷类香气前体物质的色谱-质谱联用分析研究及初步分离-茶学专业论文
独创性声明
本人声明所呈的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作 及取得的研究成果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方 外,论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研究成果,也不包含为 获得安徽农业大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与 我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确 的说明并表示谢意。
学位论文作者签名: 朱垒活
签字日期:)吵年扫 j 日
学位论文版权使用授权书
本学位论文作者完全了解安徽农业大学有关保留、使用学位论文 的规定,有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子 文件,允许论文被查阅和借阅。本人授权安徽农业大学可以将学位论 文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,收录到《中国学位论 文全文数据库)),可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编 学位论文,向社会公众提供信息服务。(保密的学位论文在解密后适 用本授权书 )0 J
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学位论文作者签名 约旦旦, 指导教师签名 作甲 I Q\
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签字日期 :ν, 年4月!日 签字日期:洲3年 J月 l 日
学位论文作者毕业后去向: 工作单位: 电话: 通信地址: 邮编:
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摘 要
茶鲜叶中的糖苷类香气前体是茶树生长发育过程中形成的次级代谢产物,其 含量较少且无味。在特定条件下,如采摘、机械损伤、昆虫取食、病菌侵染等, 叶片中糖苷类香气前体与内源酶接触会酶解释放出挥发性苷元,呈现出特定的气 味,是构成成品茶香气的物质基础。由于糖苷类香气前体在茶叶中含量极低,难 以分离获得完整的标样,因而无法进行定量分析,制约了该领域研究的深入。本 文对茶叶中糖苷类香气前体进行了初步的分析鉴定和分离纯化,为其后续的大量 分离制备研究及定量分析方法的建立提供参考,总结如下:
1.糖苷类香气前体的富集
用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇 4 种极性由小到大的溶剂对绿茶样品 依次进行超声波提取,GC-MS 辅助分析各提取部位酶解后的挥发性苷元,确定 糖苷类香气前体在甲醇部位富集;使用 HPD-500 大孔吸附树脂对甲醇部位提取 物进行柱色谱分析,用不同浓度的甲醇梯度洗脱,GC-MS 分析各洗脱部位酶解 后的苷元。分析结果表明,大孔吸附树脂对糖苷类香气前体有很好的富集作用, 香气前体主要集中在 20%甲醇部位;对 20%甲醇部位样品用氯仿萃取去除咖啡 碱,碱式乙酸铅沉淀茶多酚,得糖苷类香气前体粗提物。
2.绿茶中糖苷类香气前体的分析鉴定 对粗提物中糖苷类香气前体进行分析鉴定。①采用飞行时间质谱(TOF/MS)
得出准确相对分子量和匹配的分子式,并结合高效液相色谱-电喷雾多级质谱
(HPLC-ESI-MSn)鉴定了 11 种糖苷类香气前体物质;②探讨了茶叶中可能存在 的糖苷类香气前体在 ESI(-)离子模式下的裂解规律。
3.糖苷类化合物的分离纯化 利用多种色谱分离方法(硅胶柱色谱、Sephadex LH-20 凝胶柱色谱、ODS
柱)对糖苷类香气前体粗提物进行分离,采用电喷雾质谱(ESI-MS)和核磁共 振谱(13C-NMR、1H-NMR)对分离得到的化合物进行结构鉴定,共分离到 3 个 糖苷类化合物,分别为:山柰酚-3-O-β-葡萄糖苷(化合物 4)、松柏醇-β-D 葡萄 糖苷(化合物 5)、腺嘌呤核苷(化合物 6);3 个非糖苷类化合物,分别为:可 可碱(化合物 1)、3,5-二羟基-4-甲氧基苯甲酸(化合物 2)、没食子酸(化合物 3)。其中化合物 5 为首次从绿茶中分离得到。 关键词:茶,糖苷类香气前体,液相色谱质谱联用,分离纯化,结构鉴定
II
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Abstract
Glycosidic aroma precursors are a kind of secondary metabolites in the leaves of Camellia sinensis during growth,which have low content and no aroma.The aglycones will released from their respective glycosides by endogenous enzymatic hydrolysis under the conditions of leaf plucking, pest damage, tissue damage or malady infection etc.The released volatile aglycones demonstrate the specific odor,which are the basic part of
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