四嗪二甲酰胺诱导白血病细胞株SHI1凋亡及其分子机制研究..doc

农村小学小班化识字研究 近年来，随着国家计划生育政策的不断完 ：周永列， 吕亚萍，胡惟孝，邱莲女，王文松，刘建栋，吴建国 】本研究探讨四嗪二甲酰胺诱导白血病细胞株 SHI 1凋亡作用的机制。以不同浓度的ZGDHu 1在体外 培养SHI 1细胞，用细胞形态学、DNA凝胶电泳、DNA含 量及细胞周期分析Annexi n V/PI双标记和Hoechst3 3258 荧光染色等分析细胞凋亡。用Rhl23/PI测定线粒体跨膜电 位，用流式细胞术检测ZGDHu 1诱导SHI 1细胞凋亡过 程中bcl 2、bax、p53、Fas蛋白和线粒体膜蛋白的表达 变化。用RT PCR观察经ZGDHu 1作用后SHI 1细胞 bcl 2、bax、p53基因表达改变；同时利用实时荧光PCR 定量检测端粒酶h TERT mRNA表迗的变化。结果表明：ZGDHu 1能诱导SHI 1细胞凋亡，呈作用时间和剂量的量效关 系，出现典型的细胞形态改变，DNA片段化，亚G1峰检出并 显著增加；Annex in V/PI和Hoechst332 58荧光染色后细 胞发生凋亡的特征性改变。SHI 1细胞经不同浓度的ZGDHu 1体外培养后，bcl 2基因和蛋白有所下调，但主要是 bax基因和蛋白上调，导致bax/bcl 2比值明显增高，p53 基因和蛋白与Fas蛋白表达也上调，均呈剂量依赖性。随ZGD Hu 1作用浓度的增加，AWm下降，而线粒体膜蛋白表迗 显著升高，端粒酶h TERT mRNA的表达显著下调。结论： ZGDHu 1通过上调p53基因、bax基因和bax/bcl 2比 值，使线粒体跨膜电位显著下降的线粒体通路是ZGDHu 1 诱导细胞凋亡的途径之一，Fas也参与其中，端粒酶有可能是 其抗肿瘤的作用靶点。 关键词】四嗪二甲酰胺细胞株SHI 1细胞凋亡线 粒体端粒酶 AbstractThe aimof studywastoin vestigate themecha nismofN,N f di (m m ethylphenyl) 3,6 d imethyl 1,4 dihydr o 1,2,4,5 tetrazine 1,4 dicarboamide (ZGDHu 1) inducinga poptosisinSHI 1 hu manleukemiacelllin e.Differentconcent rationsofZGDHu lan d differenttimesof culturewereusedtot reatSHI lcells;the apoptosisof ’ SHI 1 cellswasanalyzedb y morphology,DNAag arosegelelectropho resis,DNAcontentde tection,Annexin V/ PlandHoechst332581 abelingmethod, the mitochondrialtrans membrancepotential weremeasured bydi hydrorhodaminl23, andexpressionsofbe 1 2,bax,Fas,p53and mitochondrialmembr aneprotEinwereanal yzedbyflowcytometr y,whilethebcl 2,ba  xandp53gene wereanalyzedbyRTPCR. Thetranscriptionall evel ofhTERTmRNAw xandp53gene werean alyzedbyRT PCR. The transcriptionall evel ofhTERT mRNAw asmeasuredbyreal t imefluorescencequa ntitativeRT PCR. Theresultsshowedtha tafterexposuretoZG DHu 1,SHI lcellswere inducedtoapopto sisin atime anddoe s dependent manner . SHI lcell apopos is was comfirmed by typicalcellmorph is was comfirmed b y typicalcellmorph ology,DNA fragmentHoechst33258andAnnation,subexin ology,DNA fragment Hoechst33258andAnn ation,sub exin Glphase, /PI labeling etc. Theexpression ofbax,bax/bcl 2,p5 3andFa