啤酒废酵母中谷胱甘肽的提取模型及最佳提取条件研究.doc

啤酒废酵母中谷胱甘肽的提取模型及最佳提取条件研究 :指出了我国啤酒年产量已达到5000万t， 啤酒废酵母的年产量可达50?75万t。啤酒废酵母主 要综合利用方式是将其作为饲料工业的原料，但是啤 酒废酵母中含有丰富的氨基酸、维生素、谷胱甘肽和 矿物质等有用成分，将其作为饲料工业原料后，这些 营养成分的附加值将会严重减少。打破传统的啤酒废 酵母利用方式，以成都某啤酒生产厂的啤酒废酵母为 原料提取谷胱甘肽，增加啤酒废酵母的经济附加值。 以啤酒废酵母为研宄原料，利用软件Design-expert6.0 中的响应面法分析了热水法提取啤酒废酵母中的谷胱 甘胧（glutathione，简称GSH）的提取模型和最佳提 取条件。通过响应面法分析得出热水法提取GSH的最 佳实验条件为：pH值1.6、温度61.8°C、提取时间 11.4min、料水比0.39g/mL。在此提取条件下，GSH的 提取量达7.83mg/g，通过实验验证了理论值与实验值 的相对误差为0.0008,表明响应面法得出的提取模型 和最佳实验条件合理有效。 关键词：啤酒废酵母;谷胱甘肽;响应面法;最佳 TS209 A 1674-9944 (2015) 04-0330-07 1引言 啤酒在食品工业中具有一定的战略经济地位， 2011年底世界上啤酒的年产量已达到1927亿L，啤酒 已成为继茶、碳酸饮料、牛奶和咖啡后的第五大消费 饮料［1］。中国是全球啤酒消费量和产量最大的国家， 2011年我国啤酒总产量为0.5亿t［2］,同时啤酒产量 以每年6%的百分点不断增长。 啤酒废酵母是啤酒生产过程中的主要副产物之 一，它是由啤酒和酵母细胞组成的泥浆状混合物，含 有丰富有用成分，各种物质的含量如表1所示。 啤酒酵母的有用成分和含量相对食用酵母、面包 酵母及精牛肉来说具有较高的营养价值。 随着啤酒产量的逐年增加，啤酒废酵母的产生量 也不断增大，其中每生产100t啤酒，就会产生大约1 1.5t的酵母泥［3］，废酵母的含水量在70%?90%之间［4］ 2/3的废酵母来源于主发酵沉淀酵母，剩余的废酵母 主要是后发酵贮酒罐的沉淀酵母，这些啤酒废酵母的 合理化利用将会带来可观的收益，反之将会给环境带 来巨大挑战。 目前啤酒废酵母提取制药物质的研宄中，有一个 重要的研宄方向是啤酒废酵母提取谷胱甘肽，谷胱甘 肽主要由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸组成，是一种含 y-酰胺键和巯基的三肽。谷胱甘肽是一种具有重要生 理功能的活性肽，对维持身体正常的免疫系统、抗氧 化和整合解毒等发挥重要作用。 本文以啤酒废酵母作为原料，采用热水法提取废 酵母中的GSH，同时通过响应面实验设计进行提取条 件的优化。 2实验 2.1实验装置 实验装置不意图如图1所7K。 2.2实验方法 2.2.1啤酒废酵母预处理方法 实验所用啤酒废酵母取源于成都市某啤酒生产 厂，将取得的啤酒酵母混合液分装于离心管内，以 2500r/min速度离心20min，去掉上清液，加入5倍体 积去离子水，用玻璃棒搅拌均匀，再以2500r/min速 度离心20min，重复3次，去掉上清液，用称量袋分 装沉淀的湿酵母，置于4°C的冰箱内备用。 2.2.2含水量测定 参照城市污水污泥检验方法(CI/T221-2005)， 将均匀的预处理后的啤酒废酵母称量后放入恒重的蒸 发皿在水浴上蒸干，然后在105°C的烘箱内烘干至恒 重，减少的重量与原重量的百分比值作为含水量，计 算公式如下： o=m- (ml-m2) m*100% (1) 式中：m为废酵母取样质量，g;ml为烘干恒重后 蒸发皿与废酵母的总质量，g;m2为蒸发皿的质量，g。 2.2.3GSH的测定 目前测量谷胱甘肽的方法主要有3种：四氧嘧啶 法、亚硝基铁氰化钠法、5, 51二硫代双(2-硝基苯甲 酸)法(简称TNB法)。由于四氧嘧啶法灵敏度高(R2 可达0.999以上)、准确度高、数据重现性好、显色稳 定、能避免半胱氨酸等含巯基化合物的影响，因此本 文采用四氧嘧啶法对啤酒废酵母提取液中的GSH进行 定量分析。在实验条件下，GSH与四氧嘧陡反应生成 物在305nm有最高吸收峰，人们也将该法称为四氧嘧 啶305法。 试剂配置。①lmg/mLGSH标准溶液。准确 称取O.lgGSH标准品，用去离子水定容至100mL。② 0.02mg/L四氧嘧啶溶液。称取0.08g四氧嘧啶试剂， 用去离子水定容至25mLo③0.01mol/L甘氨酸溶液。 称取0.0752g甘氨酸，用去离子水定容至100mL。④ 磷酸盐缓冲溶液。分别配置0.2mol/l磷酸二氢钠中和 O.2mol/L磷酸氢二钠溶液，将二者按照10 : 1体积混 合，既得0.2mol/L、pH值7.5的缓冲溶液。 标准曲线绘制。分别取GSH标准液(lmg/mL) 0、0.