白木香丙二烯氧化物合酶基因的表达分析Expression-药学学报.PDF

1962 药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 20 17, 52 ( 12): 1962 1969 木香丙二烯氧化物合酶基因的表达分析 1† 2† 1 1 1 1 1* 1* 冯莹莹 , 张钟秀 , 董先娟 , 刘 晓 , 闫雅如 , 王金铃 , 王晓晖 , 史社坡 (1. 北京中医药大学中药学院中药现代研究中心, 北京 100029; 2. 中国中医科学院中药研究所, 北京 100700) 摘要: 茉莉酸 (jas monic acid, JA) 为植物防御反应的重要信号分子, 其生物合成途径的关键酶是丙二烯氧 化物合成酶 (allene oxide synthase, AOS) 。本研究以白木香 (Aquilaria sinensis) 为材料, 设计特异引物, 克隆了白 木香AsA OS1 基因的cDNA 序列, 并进行氨基酸序列分析、原核表达和纯化、组织特异性分析及非生物胁迫和激 素诱导表达分析。白木香AsA OS1 基因的开放阅读框 (ORF) 长 1 575 bp, 编码524 个氨基酸, 其蛋白分子质量是 58.70 kDa 。AsAOS1 蛋白包含细胞色素P450 的保守区域。系统进化树显示AsAOS1 蛋白与甜橙 ( Citrus sinensis) AOS 蛋白同源性较高。构建原核表达载体pET28a-AsAOS1 并在大肠杆菌BL2 1(DE3) 菌株中成功表达AsAOS1 重组蛋白, 利用Ni2+亲和色谱纯化得到可溶性AsAOS1 重组蛋白。荧光定量PCR 结果显示AsA OS1 基因在茎中 表达最高, 根次之, 叶中表达最低。盐、低温和重金属胁迫能够诱导白木香愈伤组织中AsAOS1 基因表达, 诱导 12 h 表达量达到最高; 激素茉莉酸甲酯、水杨酸和脱落酸诱导后, 愈伤组织中AsA OS1 基因的表达量明显上升, 而 干旱胁迫和赤霉素处理对本 AsAOS1 基因的表达量影响不大。本研究为进一步研究茉莉酸途径在白木香结香机 制和植物防御反应中作用奠定基础。 关键词: 白木香; 丙二烯氧化物合酶; 茉莉酸; 原核表达; 表达分析 中图分类号: R93 1 文献标识码: A 文章编号: 0513-4870 (20 17) 12- 1962-08 Expression analysis of allene oxide synthase gene from Aq uilaria sinensis 1† 2† 1 1 FENG Ying-ying , ZHANG Zhong-xiu , DONG Xian-j uan , LIU Xiao , 1 1 1* 1* YAN Ya-ru , W