西伯利亚花楸组织培养技术的研究.docVIP

西伯利亚花楸组织培养技术的研究 　　摘要：以西伯利亚花楸的半木质化茎段为外植体，对其进行了组织培养研究。结果表明：以0.1%HgCl.2表面灭菌8min效果最好。在丛生芽诱导增殖培养阶段，MS+6-BA1.0mg/L+IBA0.1mg/L丛生芽诱导率和增殖率最高，分别为100%和13.6±2.3。在1/2MS+IBA0.5mg/L培养基中的生根效果最好，生根率为82.6%。移栽时，选择蛭石+草炭土（体积比为1：1）较好，有利于试管苗的成活及生长。 　　关键词：西伯利亚花楸；组织培养；移栽 　　1引言 　　西伯利亚花楸（Sorbus sibirica）为蔷薇科花楸属落叶乔木，原产俄罗斯西伯利亚地区，该树种具有较强的耐寒能力，能够忍耐-40℃以下的严寒。花白色，果橙黄色或红色，经冬不落，是优良的观花、观果园林绿化树种.[1，2]。此外，西伯利亚花楸的果实富含多种维生素，可以鲜食，其鲜果黄酮含量达0.25%～0.35%，对治疗高血压等心脑血管疾病有特殊疗效；鲜果可用于生产果汁、果酒、果酱、果脯、罐头等食品和饮料；其树皮还能制取烤胶.[2]。因此，西伯利亚花楸是一种极具开发潜力的珍贵资源。 　　西伯利亚花楸原产地为俄罗斯西伯利亚地区，该地区冬季漫长、积雪持久，为种子打破休眠和营养物质的转化提供了天然条件。西伯利亚花楸引种到我国后，由于种子休眠及气候条件等多方面的因素，出苗率及幼苗质量普遍偏低，远远满足不了快速繁殖和大量推广的需要。因此，开展西伯利亚花楸组织培养技术研究对其开发利用具有重要意义。 　　2材料与方法 　　2.1试验材料 　　试验用当年生半木质化枝条于2009年5月中旬采自辽宁林业职业技术学院院内，树干通直，树型优美，果实丰硕鲜艳，无病虫害。 　　2.2试验方法 　　2.2.1外植体的表面灭菌 　　将采集的半木质化枝条去除叶片后修剪成长约4～5cm长的茎段，于自来水下冲洗30min，洗去表面尘土。用1%洗涤剂溶液浸泡5min，再用流水冲洗30min后，分割成约1.5～2.0cm带有1个腋芽的茎段；在超净工作台上用0.1%HgCl.2溶液灭菌，灭菌时间设3个梯度：6min、8min和10min；灭菌后用无菌水冲洗6次，每次2min，用无菌滤纸吸干，再将茎段末端横切去约2mm后，接种于诱导培养基MS+6-BA1.0mg/L中进行培养，研究不同灭菌时间对无菌外植体获得率的影响，同时建立无菌再生系统。 　　2.2.2不同激素配比对西伯利亚花楸丛生芽诱导的影响 　　经诱导培养25～30d后，可获得长约3～5cm的营养枝，每个营养枝有2～3个腋芽，将其从半木质化枝条上切下，并分割成1.0～1.5cm含有一个腋芽的茎段，转接至以MS为基本培养基，附加6-BA（0、0.5、1.0、1.5mg/L）和IBA（0、0.1、0.5mg/L）的丛生芽诱导培养基中，二因素组成3×4的各种组合，每个处理接种5瓶，每瓶中接种10个外植体，重复3次。 　　2.2.3不同浓度的IBA对西伯利亚花楸生根培养的影响 　　选择继代培养中苗高在2.0cm以上的单株小苗接种于以1/2MS为基本培养基的生根培养基中，其中添加不同浓度的IBA（0、0.2、0.5、1.0mg/L），每个处理接种5瓶，每瓶中接种10个外植体，重复3次。 　　以上培养基中均附加20g/L蔗糖，6g/L琼脂粉，pH值为5.8。培养材料均置于温度25±2℃，空气相对湿度80%，光子通亮密度为30μmol·m.-2·s.-1，光周期为16h/8h。 　　2.2.4生根苗移栽 　　当生根培养的小苗根长为1.0～1.5cm时，将其开瓶移入温室练苗7d，移栽前3d用50%可湿性多菌灵800倍液喷浇灭菌，幼苗种植基质为珍珠岩+泥炭土和蛭石+草炭土两种，每种基质中2种材料的体积比均为1∶1。每种基质移植小苗1000株。 　　2.3数据分析 　　应用MINITAB 14对丛生芽诱导和生根培养试验结果进行统计分析。 　　3结果与分析 　　3.1不同灭菌时间对外植体的影响 　　外植体灭菌处理5d后，灭菌不彻底的茎段陆续开始出现污染，灭菌处理后20d的统计结果见表1。 　　从表1可知，随着消毒时间的延长，污染率下降，但同时死亡率也逐渐升高。死亡的外植体表现为腋芽和表皮细胞逐渐褐化，最终导致死亡。在用0.1%的HgCl2灭菌8min时，污染率与死亡率总和最低，无菌外植体获得率最高，达到了86.5%。 　　3.2不同激素配比对西伯利亚花楸丛生芽诱导的影响 　　将初代培养获得的营养枝茎段接种于附加不同浓度的6-BA与IBA的增殖培养基中诱导丛生芽。培养5d后，腋芽膨大，茎段基部逐渐隆起，形成小块愈伤组织。培养20d后，腋芽已经萌发，在基部愈伤组织上产生大小不同、数量不等的不定芽，但在不同培养基中外植体的表现存在明显的差