贵州短翅豆芫菁体内不同部位斑蝥素分布的研究.docVIP

贵州短翅豆芫菁体内不同部位斑蝥素分布的研究 　　摘要： 贵州短翅豆芫菁是贵州地区特有的药用昆虫，体内含有斑蝥素，但成虫体内不同部位斑蝥素含量不同。采取索氏提取法提取短翅豆芫菁不同部位的斑蝥素，用气相色谱仪定量测定。结果表明：（1）成虫不同部位所需提取时间不同：头部、四肢、翅膀需要12 h提取，胸部需要20 h提取，腹部需要40 h进行提取。（2）成虫的腹部斑蝥素含量最多，其次是胸部，再次之为头部、四肢和翅膀。（3）自然死亡的成虫体内总斑蝥素的百分含量比活体成虫体内的高。 　　关键词： 短翅豆芫菁；斑蝥素；含量；不同部位；提取时间 　　中图分类号： R282.74 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2016）03-0310-02 　　贵州短翅豆芫菁[1-2]是贵州地区独有一种斑蝥类药用昆虫[3-4]，也是中国特有的19种斑蝥类昆虫之一。贵州短翅豆芫菁体内所含斑蝥素[5]，是芫菁科昆虫特有的一种单萜类防御攻击物质，治疗肝癌，疗效显著，从而引起医药界的密切关注。斑蝥素的化学立体构型属于外型，1，2-顺-二甲基-3，6-氧桥六氢化邻苯二甲酸酐，是白色的片状结晶物质，是斑蝥酸的内酐。近年来，对斑蝥素的研究主要集中在生物合成[6-7]、功能、毒性[8]、生理、抗癌机制[9]、药理学[10]和应用[11]，而对斑蝥素在成虫虫体不同部位的分布研究较少。本研究通过对贵州短翅豆芫菁成虫不同部位斑蝥素含量的测定[12-14]，确定斑蝥素在短翅豆芫菁体内的分布情况，为进一步认识短翅豆芫菁提供了理论依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 测定仪器与试剂 　　（1）日本岛津GC-14C气相色谱仪。色谱条件：色谱柱是OV-17填充柱[苯基（50%）甲基硅氧烷，最高使用温度340 ℃，担体80～100目]；氢气压力60 kPa；空气压力40 kPa；仪器灵敏度为1；载气为高纯氮气；检测器（FID）温度为230 ℃；色谱柱温度为165 ℃；进样口温度为230 ℃；进样量 2 μL。（2）质谱仪为岛津GC-MS2010。1701柱，进样口温度250 ℃，离子源温度250 ℃，进样量0.5 μL，氮气流速20 mL/min，分流比20 ∶ 1。（3）核磁共振仪INVOA-400。共振频率：（OBSERVE）H-1，399.9 MHz；溶剂：CDCl3（氘代三氯甲烷 ）。测试条件：弛豫时间5.0 s，脉冲角45.0度，采样时间5.122 s，谱宽3 679.9 Hz，累加次数32次。（4）分析天平（上海精科分析仪器厂）。（5）分析纯三氯甲烷，分析纯丙酮，分析纯盐酸；氘代三氯甲烷，氮气。（6）斑蝥素标准品，由北京中国生物制品检定所提供。（7）短翅豆芫菁成虫采自贵州省贵阳市花溪区及惠水地区，采后在贵州师范大学自然科学应用研究所内饲养。 　　1.2 短翅豆芫菁来源与鉴定 　　成虫采自贵州省贵阳、惠水等地区，经贵阳医学院昆虫学专家陈汉彬教授鉴定，鉴别结果为短翅豆芫菁，隶属鞘翅目芫菁科。 　　1.3 斑蝥素的定性鉴定 　　纯品制备：取自然风干的短翅豆芫菁成虫用丙酮、三氯甲烷 （体积比为1 ∶ 10）及少量浓盐酸的混合溶液（pH值在 0.5～1.0）于索氏提取器上沸腾回流12 h，滤去残渣，将溶液浓缩近干，用石油醚和无水乙醇洗涤重结晶法制得白色片状结晶物质。用质谱及核磁共振谱仪进行定性分析。 　　1.4 成虫体内不同部位斑蝥素的提取方法 　　取200只短翅豆芫菁活体，按头、胸、腹、四肢、翅膀等不同身体部位用100 mL丙酮、三氯甲烷及少量浓盐酸的混合溶液（pH值在0.5～1.0）于索氏提取器上沸腾回流提取。过滤，洗涤，将滤液定容至100 mL。 　　2 结果与讨论 　　2.1 斑蝥素的定性分析 　　2.1.1 质谱 用离子源直接进样分析斑蝥素，质谱分析数据如下：128（100），110（10. 42），96（67.13），70（38.89）（图1），与谱库中斑蝥素标准图谱相符。 　　2.1.2 核磁共振谱（H1NMR） 核磁共振图谱是：1 237（s，6H，CH3×2）；4 717（m，2H，CHOHC）；1 730～1 811（d，4H，CH2×2），与谱库中斑蝥素标准图谱相符（图2、图3）[15]。由提取物的质谱及核磁共振谱可知，此提取物就是斑蝥素，即短翅豆芫菁体内亦可分泌有效成分斑蝥素。 　　2.2 气相色谱分析 　　由斑蝥素提取物的气相色谱谱图可知，保留时间tR=10.015 min，与斑蝥素标准品气相色谱谱图上的保留时间 tR=10.019 min相符（图4、图5）。 　　2.3 成虫体内不同部位提取时间比较 　　由表1、图6知，对头部、四肢、翅膀的提取，12 h后斑蝥素的含量已经趋于恒定，无需延长提取时间；胸