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羽绒羽毛粪链球菌检测标准的研究 　　摘要：本文对羽绒羽毛微生物中粪链球菌的特性、检测标准以及检测方法进行了综述，分析了各标准及方法的差异，提出了现代微生物检测技术在粪链球菌检测中应用的发展方向。 　　关键词：羽绒羽毛微生物；粪链球菌；检测方法；确证试验 　　1 前言 　　羽绒羽毛及其制品具有轻、柔、暖、抗潮等优良特性，备受广大消费者青睐，具有其他产品不可替代的优势。随着国家改革开放和市场经济的持续稳定发展，我国羽绒羽毛及其制品的进出口规模也在不断扩大。与此同时，国内外消费者对羽绒羽毛及其制品的要求不仅仅是美观舒适，而且更注重衣服的安全性、卫生性和环保性。特别是2004—2005年全球范围内禽流感疫情的发生，使羽绒羽毛及其制品作为动物源性产品，其微生物指标成为消费者关注的问题之一[1]。 　　目前国内外关于羽绒羽毛微生物检测标准有FZ/T 80001—2002《水洗羽毛羽绒试验方法》[2]、GB/T 10288—2003《羽绒羽毛检验方法》[3]、SN/T 0475—95《出口商品中粪链球菌群检验方法》[4]和EN 1884—1999《羽绒羽毛微生物状态测定方法》[5]等。涉及的羽绒羽毛微生物检测指标包括嗜温性需氧菌、粪链球菌、还原亚硫酸梭状芽孢杆菌、沙门氏菌等。粪链球菌作为其中一项重要检测指标，是引起产品不合格的主要污染菌。粪链球菌为条件致病菌，比沙门氏菌、致病性大肠杆菌抵抗性及存活率均高，能够通过羽绒羽毛及其制品感染人类。因此，粪链球菌的检测具有重要意义，可以直接或间接地表明送检样品的卫生状况以及受污染程度，并判断出该样品在使用上是否安全[6]。 　　2 粪链球菌特性 　　粪链球菌（又名粪肠球菌）含链球菌D群抗原，属于D群。种系分类法证实D群链球菌的肠球菌与链球菌同源程度低，Schleifer等于1984年将其命名为肠球菌属[7]。粪链球菌生物学特性为革兰氏阳性球菌，呈单个、成对或短链状排列，琼脂平板上生长的细菌呈球杆状，液体培养基中呈卵圆形、链状排列，无芽孢和荚膜，个别菌种有稀疏鞭毛。其培养特性为兼性厌氧，最适生长温度35℃，多数菌株在10℃和45℃均能生长，营养要求不高。所有菌株在含6.5%NaCl肉汤中能生长，在40%胆汁培养基中能分解七叶苷，不含细胞色素氧化酶和触酶。DNA的4种碱基中，鸟嘌呤和胞嘧啶（DNA GC）所占的比例为37%～45%[8]。粪链球菌所致感染最多见于泌尿道感染，是重要的医院感染病原菌。粪链球菌引起的菌血症常发生于有严重基础疾患的老年人、长期住院接受抗菌药物治疗的免疫功能低下患者[9]。不同来源的粪链球菌在致病性方面具有许多相似之处。动物源性产品很有可能会成为人肠球菌感染的一个新途径[10]。 　　3 粪链球菌检测方法比较 　　3.1 粪链球菌检测方法 　　目前，检测粪链球菌的方法有4种，分别是涂布法、滤膜法、多管法和平板法。对粪链球菌的确证试验有显微镜检查、生化检验以及血清试验3种。各标准中的具体检测方法及参数如表1所示。 　　3.2 粪链球菌检测方法分析 　　各标准检测方法的不同主要有以下两个方面： 　　（1）标准培养方法不同。FZ/T 80001—2002、GB/T 10288—2003和EN 1884—1999标准中细菌培养使用涂布法，该方法适用于细菌含量较高的样品，特点是简单、快速，可以对微生物进行分离并观察菌落特征。但在实际运用中，涂布法的接种量过少，当遇到细菌含量较低的样品时，易因检出率低，引起假阴性结果，从而误导检测人员产生错误判定。GB/T 10288—2003、EN 1884—1999以及SN/T 0475—95标准中都提及运用滤膜法，该方法对样液进行抽滤，以将样品中少量的细菌浓缩集中，适用于检测细菌含量较低的样品，特点是操作简单、快速、准确度高。在遇到样品中细菌含量较少，涂布法检出率低的情况下，应采用滤膜法进行检测，以防止漏检。此外，SN/T 0475—95标准中还提到多管法和平板法。多管法适用于细菌量较少的样品检测，对检测人员的专业判别能力具有一定的要求，缺点则是成本较高，操作繁琐。平板计数法运用于细菌量较大的样品检测，缺点是此类检测稀释梯度不够明确，不能确保单个菌落形成，不易计数。当采用涂布法或滤膜法对样品进行培养，且细菌含量过高超过有效值时，应当改用平板计数法进行。反之细菌含量过少低于有效值时，应当改用多管法对其进行培养。 　　综上所述，目前关于羽绒羽毛粪链球菌的检测标准较多，检测方法不统一，使得检验结果的差异较大。同种样品因使用不同的检测方法，其检测结果完全不同。检验人员应结合现行标准中的4种培养方法，根据样品中细菌含量的多少，针对性地选择合适的检测方法，以确保检验结果的科学性和准确性。 　　（2）标准确证试验方法不同。标准FZ/T