贵州本地山羊STAT5A基因第10外显子SNP的研究.docVIP

贵州本地山羊STAT5A基因第10外显子SNP的研究 　　摘要：利用黔北麻羊、贵州黑山羊和贵州白山羊构建DNA池，设计1对引物扩增其STAT5A基因第10外显子及部分内含子序列。PCR产物纯化后进行双向测序。DNAStar和BLAST分析确定多态性位点。利用生物信息学软件分析SNPs位点对STAT5A基因RNA二级结构、STAT5A蛋白二级及三级结构的影响。结果表明：在扩增的STAT5A基因中筛选到3个SNPs：C-32A、G+71A和G+158A，其中G+71A为错义突变，导致编码的丙氨酸（Ala）变为苏氨酸（Thr）；C-32A和G+158A均在内含子区，不参与氨基酸编码。SNPs位点对STAT5A基因RNA二级结构和STAT5A蛋白结构均有一定影响。 　　关键词：STAT5A基因；SNPs；外显子；贵州本地山羊 　　中图分类号： S827.2 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2015）07-0030-03 　　收稿日期：2014-07-24 　　基金项目：贵州省重大科技专项计划（编号：黔科合重大专项字[2011]6009号）；黔西南州种草养羊产业发展省州科技合作专项（编号：黔西南科合字[2011]5-3号）；贵州大学研究生创新基金（编号：研农2014012）。 　　作者简介：谢海强（1989― ），男，江苏常州人，硕士研究生，研究方向为分子遗传与动物育种。E-mail：xiehaiqiang1115@163.com。 　　通信作者：刘若余，博士，教授，主要从事分子遗传与动物育种研究。E-mail：liury04@163.com。 　　STAT5是信号转导和转录激活子蛋白（signal transduction and activator of transcription，STAT）家族中的重要成员之一，它包括STAT5A和STAT5B这2个亚型，其STAT同源性家族成员共有7个，分别为STAT1、STAT2、STAT3、STAT4、STAT5A、STAT5B及STAT6[1]。 在众多家族成员中，STAT5肩负着众多功能，它不仅参与细胞增殖、分化与凋亡的过程，调控细胞周期，还对生物体生长和免疫应答起重要调控作用。STAT5能够实现如此多功能，主要是通过其信号传导机制来完成，主要有JAK2-STAT5[2]、JAK3-STAT5[3]、STAT5-Foxp3[4]等信号通路 。 　　STAT5A和STAT5B在结构与功能相近，序列具有很高的同源性，它们都拥有高度保守的N端结构域，促进蛋白间相互作用的蜷曲螺旋结构域，能与DNA直接结合的DNA结合结构域，还都具有最具保守性的SH2结构域[5]。但2者在C端的转录激活结构域略有不同，具体表现为STAT5A和STAT5B在C端分别拥有20个和8个独特氨基酸序列[6]。STAT5的2个亚型蛋白不仅在结构上同源性极高，而且在功能上有许多相同点。STAT5A和STAT5B同时扮演着信号分子和转录因子的角色，它们能被生长激素（growth hormone，GH）、干扰素（interferon，IFN）、催乳素（prolactin）、表皮生长因子（epidermal growth factor，EGF）及白细胞介素（interleukin，IL）等多种因子激活，进而调控相应基因的表达。 　　STAT5A最早作为调控乳蛋白的一个乳腺因子（mammary gland factor，MGF）而被发现，在随后的研究中，发现STAT5A不仅对调控乳腺正常发育具有重要作用，还在肝细胞活性水平、免疫系统以及肿瘤调控机制[7-9]等方面都有十分重要作用。近年来，还发现STAT5A与生物生长性能有着密切联系。如Yu等在小鼠上证明了STAT5A和STAT5B通过激活 Cdkn2b 和Cdkn1a表达来负调控细胞增殖[10]；方琼等在研究家猪STAT5时同样发现其介导生长激素进而影响生长性状[11]；此外，在研究崂山奶羊时，刘园峰等发现STAT5A第9内含子上存在2个连锁突变位点，这2个突变位点显著影响着崂山奶羊的体质量、体长和胸围等生长性状[12]。 　　贵州本地山羊具有繁殖力强、屠宰率高、耐粗饲、易管理等特点，且其肉质鲜美、营养丰富，深受消费者喜爱[13]。但贵州本地山羊存在生长速度慢、个体生产性能参差不齐等问题，导致养羊效益不佳，因此提高其生长性能是解决上述问题的关键。与传统繁殖饲养方面提高山羊生长性能相比，从分子水平研究效果更明显、周期更短、回报率更高。但能用于育种的有用基因或标记仍然十分紧缺，而STAT5A则是十分理想的提高家畜生长性能的候选基因。 　　本试验利用黔北麻羊、贵州黑山羊和贵州白山羊进行DNA池构建[14]，进行STAT5A基因多态性位点（sing