高效液相色谱法测定大白菜中甲醛残留效果的研究.docVIP

高效液相色谱法测定大白菜中甲醛残留效果的研究 　　摘要 建立了高效液相色谱（HPLC）法对大白菜中甲醛残留的分析方法。使用2，4-二硝基苯肼（DNPH）60 ℃条件下衍生，HPLC-UV测定，外标法定量。结果表明，甲醛含量在0.1～5.0 mg/L间呈良好的线性关系，相关系数r2=0.999 8。添加1～10 mg/kg浓度，平均回收率在90%以上，相对标准偏差（RSD）在3.8%～4.5%。检出限（S/N=3）和定量限（S/N=10）分别为0.05 mg/kg和0.20 mg/kg，该方法具有样品前处理操作简单、准确性高、稳定性好等特点，适合农产品集中大批量抽样快速检测。 　　关键词 高效液相色谱；大白菜；农产品；甲醛；残留测定 　　中图分类号 O657.7+1 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2013）09-0281-01 　　甲醛在农业、畜牧业、生物学和医药中普遍用作消毒、防腐，在生活中也广泛使用[1]。研究表明，甲醛容易与细胞亲核物质发生化学反应，形成化合物，导致DNA损伤。因此，国际癌症机构已将甲醛列为可疑致癌物质[2]。有媒体曝光称，因为白菜水分多，当气温比较高时，2～3 d就可能腐烂，有菜贩为了降低损失，使用甲醛溶液对长途运输的大白菜进行喷洒保鲜。使用“甲醛”保鲜剂几乎成了业内的一个“潜规则”。 　　国内关于甲醛的检测报道主要集中在水产品[1-4]，而农产品比较少。本试验通过简化样品前处理过程、选择合适的色谱柱及调整流动相的比例，在4 min内可完全分离出2，4-二硝基苯肼衍生剂与甲醛衍生物，同时回收率高、检出限低，满足了农产品批量检测的工作要求。在食品安全日益受到重视的今天，对农产品中甲醛残留的监测有着重要意义。 　　1 材料与方法 　　1.1 试验材料与仪器 　　1.1.1 试剂。甲醛标准品100 mg/L（国家环保总局）；2，4-二硝基苯肼（成都科龙化工试剂厂，AR）；乙腈（德国Merck公司，色谱纯）；乙酸钠，冰乙酸（广州化学试剂厂，AR）。 　　1.1.2 仪器。电子天平（Precisa公司）；旋涡混合器（上海精科实业有限公司XW-80A）；恒温振荡器（金坛市宏华仪器厂THZ-82A）；高速冷冻离心机（Sigma公司3-30k）；超纯水系统A10（美国Millipore公司Milli-Q）；高效液相色谱仪-紫外检测器（美国Waters公司2695-2487）。 　　1.2 试验方法 　　1.2.1 样品提取。称取打成浆的大白菜5 g（精确到0.01 g），置于50 mL具塞离心管中，加入10 mL乙酸钠缓冲溶液（pH值5.0），再加2，4-二硝基苯肼溶液（0.6 g/L）10 mL。旋涡混匀后60 ℃恒温振荡，每20 min取出混匀1次，1 h后取出冷却至室温。8 000 r/min离心5 min，取上清液过0.22 μm滤膜，上机测定。空白试验，除不加试样外，均按上述操作步骤进行。 　　1.2.2 甲醛衍生物标准溶液。分别移取相应浓度的甲醛标准品置于10 mL的具塞比色试管，加入5 mL缓冲液，用2，4-二硝基苯肼溶液定容到刻度，盖塞混匀。分别配置浓度为0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0 mg/L的标准溶液作回归曲线，60 ℃恒温振荡后，按1.2.1步骤操作。 　　1.2.3 色谱条件。色谱柱ZORBAX Eclipse XDB-C18 150.0 mm ×4.6 mm（美国Agilent公司）；流动相：甲醇-水（65+35，v/v）；流速：1.0 mL/min；柱温：40 ℃；检测波长：365 nm；进样量：50 μL。 　　2 结果与分析 　　2.1 前处理条件的优化 　　2.1.1 衍生剂用量的选择。在装有1.0 mg/L甲醛标准品的25 mL具塞比色试管中先加入10 mL缓冲液，再分别加入2、5、8、10、12、15 mL的2，4-二硝基苯肼（DNPH）溶液，盖塞混匀，60 ℃恒温振荡。按1.2步骤操作，上机测试。对比甲醛衍生物色谱峰的面积，结果表明，加入1～8 mL甲醛衍生物色谱峰面积随着衍生剂DNPH的增加而变大，而加入8～12 mL峰面积并没有明显的变化，但当加入15 mL时峰面积反而减小。这可能是衍生剂DNPH用量过大吸附于色谱柱上，导致了甲醛衍生物色谱峰面积减小[5]。而衍生剂DNPH用量过小会使甲醛衍生不完全，综合考虑选择10 mL衍生剂DNPH作为试验用量。 　　2.1.2 衍生时间的选择。将1.0 mg/L浓度的甲醛标准品分别置于6支10 mL具塞比色试管中，加入5 mL缓冲液，用2，4-二硝基苯肼溶液定容至刻度，盖塞混匀，60 ℃恒温振荡。分别放置20、30、50、60、80、100 min，按1.2步骤操作，上机