VEGF及147在单核细胞来源的泡沫细胞中表达动力学的研究　.docVIP

VEGF及CD 147在单核细胞来源的泡沬细胞中表达动力学的研宄 ：岳红红朱平吴振彪樊春梅赵清波鲍炜 】目的：研究CD 147, VEGF在单核细胞来源的泡 沬细胞中的表达动力学的，探讨CD147, VEGF与动脉粥样硬 化的关系.方法：以氧化型低密度脂蛋白诱导，建立人单核 细胞系(U937细胞)分化的泡沫细胞模型，通过油红0特殊 染色的形态学鉴定.将U937细胞在不同浓度氧化型低密度 脂蛋白(ox?LDL,0, 25, 50, 100, 20 0 mg/L)条件下培养 4 8h;在100m g/L ox?LDL条件下，在培养的不同时间点 (0, 6，12, 24, 48h )分别收集泡沫细胞和培养上清，采 用流式细胞术检测细胞膜表面CD14 7，ELISA检测培养上 清中VEGF的表达和RT?PCR检测mRN A表达水平.结果:C D 147及VEGF表达出现最高峰时的ox ?LD L浓度分别为2 5mg/L和50mg /L;与1 00mg/L的氧化型低密度脂蛋白作用 6, 48 h后，CD147, VE GF表达分别出现最高峰；VEGFmRNA 水平出现最高峰时，ox?L DL作用浓度及时间分别为 200mg/L，4 8 h. CD147mR NA水平出现最高峰时ox?LDL作用 浓度及时间分别为25mg/L，6h ,此后，mRNA水平不变.结 论:VEGF及C D14 7在单核细胞来源的泡沬细胞表达均升高； C D147表达上调早于VEGF，低浓度ox?LDL促进CD147表达， 高浓度促进VEG F的表达;U937泡沫细胞中VEGF的m RNA水 平与ox?L DL的作用浓度及时间成正相关，泡沫细胞中 CD 147的mRNA与ox?LDL的作用浓度及时间无关. 关键词】CD14 7；血管内皮生长因子类；泡沬细胞； 动脉硬化 0引言 泡沫细胞（fo amcells ）是动脉粥样硬化斑块内出现 的特征性病理细胞，其主要来源有两个，一是血液单核细 胞，二是血管中膜平滑肌细胞.一般认为在动脉粥样硬化形 成的早期，血液中单核细胞进入内皮下间隙，在内膜下被 氧化型低密度脂蛋白（ox?L DL）、炎性介质等激活后分化为 巨噬细胞，后者通过其表面的清道夫受体吞噬ox?L DL形成 泡沫细胞，并逐渐演变成脂纹及粥样斑块[1].动脉粥样 硬化不仅是脂代谢紊乱的过程，也是炎症反应的过程.因此， 泡沫细胞是粥样斑块中重要的炎症细胞[2].长期的慢性 炎症性疾病可导致机体内免疫分子、炎症因子等炎性介质 水平明显升高[3].不但可调节机体免疫反应，而且能够 作用于外周组织导致一系列致动脉粥样硬化代谢功能改变 [4].研宄表明，在泡沬细胞形成过程中CD1 4 7分子及 VEGF的表达上调.此外，新近在动脉粥样硬化斑块中也检测 到CD147分子及血管内皮生长因子（VE GF ）等炎症介质， 提示其可能参与了动脉粥样硬化的发生[5-6 ].鉴于C D147分子及VEGF在炎性斑块中的作用，且目前鲜有对其在 泡沫细胞形成过程中表达变化的研宄，我们建立人类单核 细胞（U937）源性泡沫细胞模型［7］，进一步探讨CD147, VEGF等炎性介质在动脉粥样硬化发生中的作用. 1材料和方法 材料低密度脂蛋白（LDL）及VE GF的ELISA检测试剂 盒（CHENICON , US）；硫代巴比妥酸（TBA）（南京建成生物 工程研宄所）；FITC标记小鼠抗人CD1 4 7 （RD，US） .F ACSCalib ur （Bectom?Diek inson, Frank linLa kes, NJ ）流式 细胞仪. 方法 ?L DL的制备将LDL置于含10ymol/L CuS04的磷酸缓 冲液（PBS）中，37°C透析12h后，在lg/L EDTA的PBS中透 析24h，um微孔滤膜过滤除菌备用.用硫代巴比妥酸物质的 含量鉴定ox ?LDL，氧化后每毫克胆固醇中丙二醛含量为P mol /g. 细胞株及泡沫细胞模型的建立u 937细胞株系人类单核 细胞系，由中国科学院上海细胞生物研宄所提供，在含 100ml/L胎牛血清的RPMI7164 0培养基中悬浮生长，置于 50mL/L⑶2培养箱中培养.将细胞稀释至5X1 012/L,种于 24孔板中每孔ImL ，分别与不同浓度ox? L DL （0, 25, 50 , 100, 200mg/L）共孵育 24h.将相同密度的 U937 细胞与ox?LDL（10 0m g/L）共孵育不同时间（0,3,6, 12, 2 4, 48h) . U937泡沫细胞形态通过新配制的3ml /L油红0染 色鉴定，胞质内出现红染颗粒的为脂质染色阳性. 细胞膜表面CD147流式检测将孵育后细胞悬液，经PBS 洗涤2次后调整细胞密度为1 X