w第1章第1节基因工程概述2基因工程的一般过程与技术导学案2.docVIP

IWGVANO MJpIH E SCHOOL 高二生物选修3导学提纲2 3-1-1基因工程概述2基因工程的一般过程与技术导学案 学习过程】 基因工程的基本过程 一、获得目的基因（目的基因的获取） 获取方法主要有两种： （1）、从自然界中己有的物种中分离出来，如可从基因文库中获取。 基因文库：将含有某种生物不同基因的IT?多_DNA片段 ,导人受体菌的群体中储存，各个受体菌分 别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。 提示：受体菌在培养基上以菌落形式存在，每一个菌落都由一个细胞繁殖而来，携带着同种基因，可以利用 目的基因的有关信息，找到目的基因所在菌落，然后再进行提取。 r基因组文库：含有一种生物的 所有 基因 种类J cDNA文库：含有一种生物的 部分 基因，可由mKNA反转录而来 H的基因的获取 根据基因的有关信息：基因的 序列、基因在 上的位置、基因的 _产物mRNA、基因的 产物蛋白质等特性获取目的基因。 脱氧核苷酸染色体转录翻译 （2）、用人工的方法合成。 ★获得原核细胞的目的基因可采取直接分离,获取真核细胞的目的基因一般是人工合成。 ★人工合成目的基因的常用方法有反转录法和化学合成法。 例1下列获取目的基因的方法中需要模板链的是（） ①从基因文库中获取目的基因②利用PCR技术扩增0的基因③反转录法④通过DNA合成仪利用化学 方法人工合成 ①②③④ B.①②③ C.②③④ D.②③ 利用PCR技术扩増目的基因 （1） PCR的含义：是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。 （2） 目的：获取大量的目的基因 （3） 原理：DNA双链复制 （4） 原料：模板DNA; RNA引物；四种脱氧核订酸；热稳定DNA聚合酶（Taq酶）；离子 （5） 方法：DNA受热变性解旋为单链、冷却后RNA引物与单链相应互补序列结合、DNA聚合酶作用下延仲合成互 补链。 （6） 过程：第一步：加热至90?95°C DNA解链为单链; 第二步：冷却到55?60°C,引物与两条单链DNA结合; 第三步：加热至70?75°C,热稳定DNA聚合酶从引物起始进行互补链的合成。 （7） 特点：指数形式扩增=2n（n为扩增循环的次数） 二、制备重组DNA分子（基因表达载体的构建） 表达载体的组成：目的基因+ 启动子+终II:子+标记基因等。 ★标记基因的作用：鉴定受体细胞中是否含有目的基因,从而将含有目的基因的细胞筛选出来。 启动子：位于基因的_首端_，它是_RNA聚合酶识别和结合 的部位，驱动基因转录产生 mRNA。 质粒■S—腿分子种限制酶处理DNA连接酶重组 质粒 ■S— 腿分子 种限制酶处理 DNA连接酶 重组DNA分子O组质粒） 表达载体的功能：使n的基因在受体细胞中稳定存在，并且 _遗传_给下一代；使目的基因_能够表达_和发挥作用。 标记基因：鉴别受体细胞是否含有目的基因。 不同的受体细胞及目的基因导入受体细胞的方法不同，基因表达载 体的构建上也会有所差别。 方法：歷限制酶分别切割载体和目的基因，再用DNA连接酶把两者连接 例2、科学家在培育抗虫棉时，经过了许多复杂的过程和不懈的努力，才获得成功。起初把办云金芽孢杆菌 的抗虫基因插入载体质粒中，然后导入棉花的受精卵中，结果抗虫基因在棉花体内没有表达。然后在插入抗虫基 因的质粒屮插入启动子（抗虫基因首端），导人棉花受精卵，长成的棉花植株还是没有抗虫能力。科学家乂在有启 动子、抗虫基因的质粒中插入终止子（抗虫基因末端），导入棉花受精卵，结果成长的植株，有了抗虫能力。由以 上过程推知，作为目的基因的运载体应具备的结构是（） 目的基因、启动子 B.目的基因、终止子 C.目的基因、启动子、终止子 D.目的基因、启动子、终止子、标记基因 三、转化受体细胞（将目的基因导入受体细胞） 转化的概念：是目的基因进入受体细胞内,并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。 常用的转化方法： a、 将目的基因导入植物细胞：采用最多的方法是丞赶直介导转化技术（农杆菌转化法）,其次还有基因枪介导 转化技术（基因枪法）和花粉管通道技术（花粉管通道法）。 （1） 农杆菌转化法 农杆菌特点：易感染 双f叶植物和裸子植物，对_大多数单了叶_植物没有感染力;Ti质粒的 T一DNA可转移至受体细胞,并整合到受体细胞的染色体上。 转化：目的基因插人Ti质粒的T—DNA上〉农杆菌一导入植物细胞- FI的基因整合到植物细胞染 色体上一目的基因的遗传特性得以稳定维持和表达。 （2） 基因枪法 基因枪法：是单子叶植物中常用的一种基因转化方法，但是成本较高。 （3） 花粉管通道法 花粉管通道法：这是我国科学家独创的一种方法，是一种十分简便经济的方法。（我的的转基因抗虫棉就 是用此种方法获得的） b、 将目的基因导入动物细胞：最常用的方法是显