试验十四单宁含量的测定.PPT

实验十四 单宁含量的测定 主讲：葛含静 一、实验类型 设计型实验 二、实验目的 1．了解单宁各种测定方法的特点并比较。 2．引导学生设计测定单宁的详细方案并实施，分析对比各实验方法及其结果。 三、实验原理 比色法：样品中的单宁在碱性溶液中将磷钨钼酸还原，生成深蓝色化合物，其颜色深浅与单宁含量成正比，可与标准进行比较定量。 EDTA络合法：单宁可与重金属离子形成络合物而沉淀。在单宁样品提取液中加入过量的标准Zn(Ac)2溶液，待反应完全后，用EDTA标准溶液滴定剩余Zn(Ac)2，根据EDTA标准溶液的消耗量，可计算出样品中单宁的含量。 高锰酸钾滴定法：单宁可被活性炭吸附、被高锰酸钾氧化，根据吸附前后氧化值之差即可计算出样品中单宁含量。指示剂靛红被高锰酸钾氧化，由蓝色变为黄色，从而指示终点。 四、实验仪器和材料 1. 仪器：电子天平，分光光度计，研钵，容量瓶，碱式滴定管，滤纸，烧杯，漏斗，刻度吸管。 2. 试剂： （1）比色法： 标准单宁酸溶液（0.5 mg/mL）、F-D试剂、1 M 碳酸钠溶液。 （2）EDTA络合滴定法： 1.000 M Zn(Ac)2标准溶液、0.0500 M EDTA标准溶液、pH=10 NH3-NH4Cl缓冲溶液、铬黑T指示剂、石英砂。 （3）高锰酸钾滴定法： 1 g/L靛红（靛蓝二磺酸钠）溶液、0.05 M 高锰酸钾标准溶液、粉状活性炭。 3. 样品：青柿子、葡萄籽或石榴皮150 g 五、实验设计参考 1．样品处理：称取样品，研磨成浆状，用水提取单宁。 2．样品测定： （1）比色法： 绘制标准曲线：按照下表编号，分别加入各种试剂于50 mL容量瓶，加完后，剧烈振摇，以蒸馏水稀释至刻度，充分混合，于30 ℃恒温箱中放置1-1.5 h后，测定A680，并制作标准曲线。 样品测定：样品切碎后迅速称取50 g于研钵中，加入95%乙醇50 mL、偏磷酸溶液50 mL、水50 mL，磨成浆状。称取匀浆液20 g于100 mL容量瓶中，加入75%乙醇40 mL，沸水浴加热20 min，冷却后用75%乙醇定容。充分混合后以慢速滤纸过滤，弃去初滤液。吸取滤液2 mL于50 mL容量瓶中，加入水25 mL、F-D试剂2.5 mL、碳酸钠溶液10 mL，剧烈振摇后，用水定容（溶液逐渐产生蓝色）。同时做空白实验。于30℃恒温烘箱中放置1.5 h后，以空白试剂调零，测定A680。 （2）EDTA络合法： 准确称取切碎的样品5 g于研钵中，加少许石英砂研磨成浆状，转入150 mL锥形瓶中，用50 mL水以多次洗净研钵，洗液并入锥形瓶，振动、提取10-15 min。 在100 mL容量瓶中准确加入Zn(Ac)2标准溶液5 mL、浓氨水3.5 mL，摇匀（开始有白色沉淀，摇动使沉淀溶解）。慢慢将提取物转入容量瓶中，不断振摇，在35 ℃温水浴中保温20-30 min，使单宁充分络合。冷却，用水定容，混匀，静置，过滤（初滤液弃去）。 （3）高锰酸钾滴定法： 吸取滤液10 mL于150 mL锥形瓶中，加水40 mL、NH3-NH4Cl缓冲溶液12.5 mL、铬黑T指示剂10滴，混匀。用EDTA标准溶液滴定，溶液由酒红色变为蓝色即为终点。 六、实验结果处理参考 1. 比色法： （1）实验记录： 另取样品溶液10 mL，加入活性炭粉2-3 g，水浴加热搅拌5 min以吸附单宁。过滤，用85 mL热水洗涤数次，滤液和洗涤液收集于锥形瓶中，加入靛红溶液2.5 mL，再以前面方法滴定。 （2）结果计算： 2. EDTA络合法： （1）实验记录： （2）结果计算： 3. 高锰酸钾滴定法： （1）实验记录： （2）结果计算： 结果分析： 分析并对比三种方法的优缺点，思考并归纳实验过程中可能对实验结果造成影响的操作细节。 样品捣碎，准确称取10 g于100 mL烧杯中，用约150 mL水分多次移入250 mL容量瓶中，充分振摇后定容，摇匀。用干滤纸过滤得到澄清溶液（否则重新过滤）。吸取澄清样品溶液10 mL于瓷皿或烧杯中，加入靛红溶液2.5 mL、水75 mL，用高锰酸钾标准溶液滴定至明亮的金黄色即为终点。