生物化学试验_百度文库.DOC

※ 实验一 糖的性质实验 糖的颜色反应 ※ 实验一（1） 【实验目的及要求】 1. 掌握莫式（Molisch）试验鉴定糖的原理和方法。 2. 掌握塞式（Seliwanoff）试验鉴定酮糖的原理和方法。 【实验原理】 1．莫式试验：糖经无机酸（浓硫酸、浓盐酸）脱水产生糠醛或糠醛衍生物，后者在浓无机酸作用下，能与а-萘酚生成紫红色缩合物。 2．塞式试验：酮糖在浓酸的作用下，脱水生成5-羟甲基糠醛，后者与间苯二酚作用，呈红色反应；有时亦同时产生棕红色沉淀，此沉淀溶于乙醇，成鲜红色溶液。 【实验仪器及用品】 仪器：水浴锅。 器皿：吸管、试管。 实验药品：蔗糖、葡萄糖、淀粉、果糖、阿拉伯糖、半乳糖、а-萘酚、浓硫酸、95%乙醇、间苯二酚、盐酸、间苯三酚。 【实验试剂】 莫式试剂：а-萘酚5g,溶于95%乙醇并稀释至100ml。现用现配，并贮于棕色试剂瓶中。 塞式试剂：间苯二酚50mg，溶于100ml盐酸（VH2O：VHCl=2:1），现用现配。 【实验内容及步骤】 一、莫式实验 于4支试管中，分别加入1 ml1%葡萄糖溶液、1%蔗糖溶液、1%淀粉溶液和少许纤维素（棉花或滤纸浸在1 ml水中），然后各加莫式试剂2滴，摇匀，将试管倾斜，沿管壁慢慢加入浓硫酸1.5 ml（切勿振摇！），硫酸层沉于试管底部与糖溶液分成两层，观察液面交界处有无紫色环出现。 二、塞式试验 于4支试管中，分别加入0.5 ml1%葡萄糖溶液、1%蔗糖溶液、1%果糖溶液，然后各加塞式试剂2.5ml，摇匀，同时置沸水浴内，比较各管颜色及红色出现的先后顺序。 【实验现象观察并记录】 仔细观察实验中的颜色变化，对于塞式试验和杜式试验还需记录下颜色变化的时间。 ※ 实验一（2） 【实验目的及要求】 掌握糖的还原反应来鉴定糖的原理和方法。 【实验原理】 费林(Fehling)试剂和本尼迪(Benedict)试剂均为含Cu2+的碱性溶液，能使具有自由醛基或酮基的糖氧化，其本身则被还原成红色或黄色的Cu2O，此法常用作还原糖的定性或定量测定。 【实验仪器及用品】 实验仪器：水浴锅 实验器皿：吸管、试管 实验药品：硫酸酮、氢氧化钠、酒石酸钾钠、柠檬酸钠、无水碳酸钠、淀粉、蔗糖、葡萄糖。 【实验试剂】 1. 费林试剂 试剂A：CuSO4·5H2O 34.5 g,溶于蒸馏水并稀释至500 ml。 试剂B：氢氧化钠125 g，酒石酸钾钠137 g，溶于蒸馏水并稀释至500 ml。 临用时将试剂A与试剂B等体积混合。 2. 本尼迪试剂：柠檬酸钠（Na3C6H3O7·11H2O）及50 g无水碳酸钠，溶于400 ml蒸馏水中。另溶解8.5 g硫酸铜于50 ml热水中。将硫酸铜溶液缓缓加入柠檬酸钠-碳酸钠溶液中，边加边搅拌，如有沉淀可过滤。此混合液可长期使用。 【实验内容及步骤】 于3支试管中加入费林试剂A和B各1 ml，混匀，分别加入1%葡萄糖溶液、1%蔗糖溶液和1%淀粉溶液1 ml，置沸水浴中加热数分钟，取出，冷却，观察各管的变化。 另取3支试管，分别加入1%葡萄糖溶液、1%蔗糖溶液和1%淀粉溶液1 ml，然后每支试管加本尼迪试剂2 ml，置沸水浴中加热数分钟，取出，冷却，和上面结果比较。 糖的还原作用 ※实验一（3） 总糖的测定——蒽酮比色法 【实验目的】 1、 学习蒽酮比色定糖法的原理和方法。 2、 学习721型分光光度计的原理和操作方法。 【实验原理】 总糖是指样品中的还原单糖及在本法测定条件下能水解成还原单糖的蔗糖、麦芽糖和可部分水解为葡萄糖的淀粉。 蒽酮比色法是测定样品中总糖量的一个灵敏、快速、简便的方法。其原理是糖类在较高温度下被硫酸作用脱水生成糠醛或糠醛衍生物后与蒽酮（C14H10O）缩合成蓝色化合物。溶液含糖量在每mL150μg以内，与蒽酮反应生成的颜色深浅与糖量成正比。蒽酮不仅能与单糖也能与双糖、糊精、淀粉等直接起作用，样品不必水解。 721型分光光度计为上海第三分析仪器厂产品。采用自准式光路，单光束方法。其波长范围为360～800nm，用钨丝白炽灯为光源。由灯泡发出的连续辐射光线，经过聚光透镜会聚后，再经过平面镜转90角。光线反射后，经入射狭缝而入射到单色器内。狭缝正好位于球面准直物镜的焦面上。当入射光线经过准直物镜反射后，就以一束平行光射向棱镜，并在其中色散。入射角在最小偏向角，入射光在铝面上依原路反射回来，再经过准直物镜反射，而会聚在出光狭缝上。由狭缝出来的光通过被测的溶液，再射到GD-7型光电管上。GD-7型光电管的锑、铯、钾、钠阴极面对整个可见光区都较敏感（光谱灵敏范围为350～850nm）。光电管受光后所产生的光电流，经过一组高值电阻（50M、500M、1KMΩ），在电阻两端形成一个电压降，通过电压降的测定来间接地测量光电流的变化。 【器材】 1、试管（或具塞试管）