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芳香化酶在乳腺癌发生和发展中的作用机制研究-肿瘤学专业论文
汕头大学医学院硕士毕业论文
汕头大学医学院硕士毕业论文
万方数据
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学位论文知识产权声明
本人在就读研究生期间所完成的学位论文以及相关结果,知识产权归属 汕头大学医学院。本人在毕业离校前会将有关的研究资料和结果全部上交导 师,离校后发表或使用学位论文或与学位论文直接相关的学术论文或成果时, 须征得导师及导师所在单位的同意,并要求署名单位仍为汕头大学医学院。 本人不得以本论文的研究成果申报研究课题。导师和导师单位可以将学位论 文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描 等复制手段进行保存、汇编学位论文,可以公布(包括刊登)论文的全部或 部分内容。导师及导师所在单位享有发表学位论文、申请成果和专利的权利。
注:保密的学位论文在解密后适用本声明。 研究生签名: 日期: 年 月 日 导师签名: 日期: 年 月 日
摘要
背景与目的
雌激素(estrogen,E2)是乳腺癌的主要致癌原,通过与雌激素受体(estrogen receptor, ER)结合而促进肿瘤细胞的增殖和生长。在绝经后的乳腺癌患者中,雌激素的主要来源是 外周组织中的雄激素通过芳香化酶(aromatase,Arom)的催化作用转化为雌激素,芳香化 酶抑制剂(aromatase inhibitors, AIs)可阻断这一反应,从而阻断肿瘤细胞的生长,是绝经 后激素受体阳性的乳腺癌患者辅助内分泌治疗的一线方案。
然而,AIs 的耐药成为临床应用中的最大问题,过去的研究主要集中在 ER,ER 信号 通路与生长因子受体信号通路之间的串话机制研究,目前 AIs 的耐药机制仍不明确。芳香 化酶(aromatase, Arom)是利用睾酮合成雌激素的限速酶,广泛存在于人体,在女性胎盘, 脂肪组织及脑(包括下丘脑,海马,杏仁核等)中含量较高。雄激素经芳香化酶、NADPH 等辅基的氧化还原反应转化为雌激素的同时还可产生活性氧(reactive oxygen species, ROS)。在正常的生理情况下,机体多种抗氧化酶 SOD、GPx、GST、CAT 等不断清除细 胞内产生的 ROS 及自由基。ROS 在不断产生及清除中保持氧化还原系统稳定,并在人体 整个生理过程中发挥重要作用。ROS 在肿瘤中也有重要作用,是参与细胞内信号传导的第 二信使。已有研究表明 ROS、E2 可以激活 c-src 激酶及下游信号通路,Arom 可以被 c-src 激酶磷酸化,磷酸化位点是第 361 位的酪氨酸(pY361Arom)。我们的前期研究表明 Y361
-Arom 可以与 PI3K 调节亚基 p-85 结合,激活 PI3K 信号通路,而 c-src 激酶的抑制剂 AZD0530
(PP2)可以阻断这种结合,逆转乳腺癌细胞对 AIs 的耐药。因此我们推测:1、Arom 在 乳腺癌中维持体内氧化还原系统稳定中发挥重要作用,对乳腺癌的发生及发展具有重要影 响。2、c-src 可被 ROS、AD 激活,继而引起芳香化酶的磷酸化,激活下游 PI3K 信号通路, 可能是导致 AIs 发生耐药的主要原因之一,pY361Arom 可能是预测乳腺癌对 AIs 敏感性的 一个标志物。本研究制备了特异识别 Y361 磷酸化芳香化酶的抗体,将对 Arom 及 pY361Arom 在乳腺癌发生发展中的作用及 AIs 耐药的机制进行探索性研究。
方法
第一部分 pY361Arom 抗体制备及在乳腺癌中的临床意义
I
II万方数据
II
万方数据
.公司合成多肽片段,通过动物免疫的方法制备了 pY361Arom 多克隆抗体,用 ELISA、 免
疫印迹、免疫组化等方法鉴定其敏感性和特异性;
.收集汕头大学医学院附属肿瘤医院用 AIs 内分泌治疗的绝经后乳腺癌患者 60 名,通过回 顾性分析其临床资料,归纳总结临床病理资料,采用免疫组化的方法检测乳腺癌组织中 pY361Arom 的表达情况,并用 SPSS17.0 软件进行统计学分析,采用卡方检验及 Fisher 精 确检验来分析 pY361 表达水平与乳腺癌患者临床病理学参数的关系;采用 Kaplan-Meier 生存分析方法进行总生存分析,组间比较采用 log-rank 检验法。P≤0.05 为差异具有统计学 意义。
第二部分 Arom 在 ER 阴性的乳腺癌细胞株中的作用
1.建立稳定敲减 Arom 的 SKBR3-shArom 细胞系,采用细胞增殖实验,划痕实验,克隆形 成实验,迁移及侵袭实验,用免疫印迹法检测 Arom 对 pAKT(S473), p-85 等蛋白的影响来 探讨 Arom 对 ER 阴性的乳腺癌细胞的作用;
2.c-Src 抑制剂(PP2)处理 BT549, SKBR3, MDA-MB-231 细胞后,用免
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