雌激素受体β亚型在乳腺癌内分泌治疗耐药中的作用-基础医学专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取 得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不 包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志 对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。 学位论文作者签名： 日期： 年 月 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定， 即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用 影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有 关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。 本论文属于 保密 ，在 年解密后适用本授权书。 不保密 。 （请在相对应的方框内打“√” ） 学位论文作者签名： 日期： 年 月 日 导 师 签 名 ： 日期： 年 月 日 天津医科大学硕士学位论文 天津医科大学硕士学位论文 中文摘要 目的: 探讨在乳腺癌中，雌激素受体 α 亚型（Estrogen Receptor α，ERα）和 β 亚型 （Estrogen Receptor β，ERβ）的表达，以及与内分泌治疗耐药的关系和机制。 方法： 1、以人乳腺癌细胞株 MCF-7 和 MDA-MB-231 作为研究对象，采用半定量 RT-PCR 法和 Western Blot 法检测这两种细胞株 ERα 和 ERβ 的表达；在培养 24h、 48h、72h、96h 后，采用 MTT 法检测各自的增殖情况。 2、以人乳腺癌细胞株 MCF-7 和 ERα/ERβ 不同表达的人乳腺癌细胞株 MCF-7 [M/siα（ERαlow/ERβhigh）、M/siβ（ERαhigh/ERβlow）、M/HK （阴性对照）] 作为研究对象，单独或联合应用不同终浓度的 TAM（0.1、0.5、1、5、10 μmol/L） 和人重组 IFN-γ（rhIFN-γ）（0.5，100 ng/mL）处理细胞，MTT 法分析药物对细 胞增殖的影响；半定量 RT-PCR 法和 Western Blot 法检测 rhIFN-γ（0.5 ng/mL） 对人乳腺癌 MCF-7 细胞中 ERβ 表达的影响。 3、以 MCF-7、M/siα、M/siβ、M/HK 作为研究对象，半定量 RT-PCR 法检 测其耐药基因 MDR1、TOPOII、LRP 和 GST-π 的 mRNA 表达水平； Western Blot 法检测其耐药相关信号通路 MAPK、PI3K/Akt 中 p-ERK、p-Akt 的蛋白表达水平。 结果： 1、半定量 RT-PCR 法检测结果显示，MCF-7 细胞中 ERα 的 mRNA 表达水 平显著高于 MDA-MB-231 [（0.191 ± 0.005）vs（0.153 ± 0.003），P＜0.05]，ERβ 的 mRNA 表达水平低于 MDA-MB-231 [（0.462 ± 0.001）vs（0.587 ± 0.004）， P＜0.05]；Western blot 检测结果显示，MCF-7 细胞中 ERα 的蛋白水平明显高于 MDA-MB-231 [（0.796 ± 0.002）vs（0.041 ± 0.008），P＜0.05]，ERβ 的蛋白水 平略低于 MDA-MB-231 [（0.57 ± 0.011）vs（0.98 ± 0.009），P＜0.05]；MTT 法检测结果显示，经过 24h、48h、72h 培养，MCF-7 细胞和 MDA-MB-231 细胞 的增殖水平无显著性差异 [（1.121 ± 0.002）vs（1.201 ± 0.062），（1.232 ± 0.012） vs（1.287 ± 0.054），（1.376 ± 0.028）vs（1.401 ± 0.033），P0.05]，经过 96h 培养，MCF-7 细胞的增殖率明显高于 MDA-MB-231 [（2.215 ± 0.07） vs （1.469 ± 0.011），P0.05]。 2、MTT 法检测结果显示，用不同浓度的 TAM 处理细胞 24h，与对照组 MCF I 细胞相比，ERβ 高表达可促进高浓度 TAM（1、5、10 μmol/L）对 MCF-7 细胞 增殖的抑制作用 [（45.788 ± 1.641）% vs（24.288 ± 1.170）% 57.899 ± 1.583）% vs （31.499 ± 1.978）%，（59.853 ± 1.648）% vs （38.039 ± 1.482）%，均 P ＜0.05）]，并且该抑制作用与 TAM 浓度呈剂量依赖关系；用 rhIFN-γ（0.5，100 ng/mL）预先处理 7