表皮生长因子复合可降解胶原膜防止鸡鞘管区肌腱粘连的实验-研究.pdfVIP

直塞查匿堂筮亟主堑塞圭兰焦鲨窒f；鲤i堡! o 染色步骤 ①常规脱蜡至水。 ②3％H202室温lO分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。 ③1％胰蛋白酶消化20分钟，PBs(Pm．2—7．6)洗涤3分钟×3次。 ④滴加5％BsA封闭液，室温20分钟。甩去多余液体，不洗。 ⑤滴加I型或Ⅲ型胶原的一抗(浓度为1：loo)4℃过夜，PI强洗涤3分钟×3次。 ⑥滴加二抗，室温20分钟，PBs(肿．2—7．6)洗涤3分钟×3次。 ⑦滴加试剂sABc，室温20分钟，PBS(Pm，2—7．6)洗涤5分钟×4次。 ⑧DAB显色，蒸馏水洗涤。 ⑨苏木素轻度复染。脱水、透明、封片。 经上述步骤染色，I型及Ⅲ型胶原纤维被染成棕黄色。经图像分析仪测定各组之间 I型及Ⅲ型胶原纤维在每高倍镜视野下所占面积的百分比，比较各组问I型及Ⅲ型胶原 纤维的含量。 1．4．3电镜观察：分别将各组动物腱缝合段相应部位取1mm长的组织块修成lmm ×1mm×4mm的长条状，立即置于4％戊二醛中固定2天，1％锇酸后固定，逐级酒精脱 水，环氧树脂包埋，超薄切片，铀铅双重染色，电镜下观察各组腱缝合段成纤维细胞、胶