叶绿体中色素的提取和分离-生物科组.DOC

巧用注射器对 “叶绿体中色素的提取和分离”实验的改进 刘肖珍 摘要：本实验是人教版生物必修一的实验，本改进实验对实验的材料、层析液及层析装置、层析滤纸和操作方法步骤进行改进，并与原实验进行比较。结果表明：材料大红花叶（Hibiscus rosa-sinensis L. var. rubro-plenus Sweet.），层析液92号汽油，操作方法用纱布包住注射器过滤并点样和用注射器将层析液注射到圆形滤纸进行层析，操作更简单、装置更简易、效果更理想，取材方便、成本低、污染少。 关键词 色素提取 分离 层析 注射器 圆形滤纸 叶绿体中色素的提取和分离实验是人教版生物必修一的实验，本实验比较复杂但又非常重要，是实验操作常考知识点，也是学生要掌握的实验操作。在实验教学实践中发现按照教材所提供的方法进行实验教学时，操作技术要求较高，操作繁琐，实验耗时较长，材料及层析液用量多且造成浪费，学生操作起来有一定的难度，很难达到理想的效果；另外，在实验中还用了丙酮、石油醚等一些有毒且易挥发的有机试剂，影响学生及实验老师的健康。 目前对“叶绿体中色素的提取和分离实验”的研究较多。陈云扬[1]等对实验材料选用不同处理方法、选用不同提取液、选用不同层析液进行研究；聂瑜奕[2]等选用不同提取方法进行研究；石渊伟[3]等对实验装置进行改进；范国树[4]，李彦平[7]等选用不同材料，改变提取液、研磨方法、过滤方法、滤液细线的画线方法进行研究；施亚筠[5]对添加丙酮时间的把握、画滤液细线方法的改进、提取液的改进、层析液的改进、过滤制滤液的改进。本研究旨在通过对 “叶绿体中色素的提取和分离”实验的优化，提高实验的可操作性，降低实验的难度和成本，减少实验对人体的伤害，体现了简易原则、安全性原则及科学性原则。 1.目前实验中存在的缺陷 1.1材料的选择 课本实验常用的材料是菠菜，菠菜具有季节性及地方性，受季节及环境影响较大，种植也比较困难，用时一般需在市场购买并进行保险处理，取材不方便，成本较高，且菠菜利用率不高造成浪费。 1.2层析液的使用 实验过程常用的层析液是石油醚、苯、及丙酮的混合液和92号汽油。而石油醚、苯及丙酮混合液挥发性较强，且毒性较大，对实验员及学生伤害较大。中学实验中多选用汽油作为层析液，而汽油挥发性强且气味刺鼻，实验过程中大量使用汽油（每组2-3ml）造成浪费及污染。 1.3层析滤纸的选择 实验过程中用于层析的滤纸条需剪去两边的角，而如何剪对称，如何将滤液细线画得细、直、齐，我们在实验中难以把握。学生在实验过程中纸条剪角不对称，滤液细线难以达到细、直、齐的要求，导致实验效果不理想。 1.4仪器用具的使用 1.4.1学生在实验过程中需使用天平来称量叶片、使用漏斗对研磨液进行过滤及使用毛细吸管吸取研磨液并用来画细线，操作较麻烦。 1.4.2漏斗及毛细吸管均属玻璃制品容易被学生弄坏弄碎。 2.实验器材及装置 实验仪器和用具：注射器（1ml 5ml） 研钵 定性滤纸 剪刀 培养皿 纱布 药品：92号 汽油 无水乙醇 碳酸钙 二氧化硅 材料：新鲜大红花叶（Hibiscus rosa-sinensis L. var. rubro-plenus Sweet.） 图1 实验器材 3.实验步骤 本实验包括色素的提取和色素的分离。根据色素能溶解在无水乙醇中可用无水乙醇提取色素，根据色素在92号汽油中的溶解度不同可用92号汽油作层析液。 3.1色素的提取 3.1.1取4张新鲜大小适中的大红花叶（约2.5g），剪碎，加入少量碳酸钙和二氧化硅，用注射器吸取5ml无水乙醇（液料比约2:1，与课本相符），研磨至糊状。 3.2.2用纱布包住注射器吸取0.1ml研磨液，静置待用。 3.2色素的分离 3.2.1将滤纸防止培养皿上，将研磨液轻轻点在滤纸中央，待研磨液干了再点，重复多次。 3.2.2用注射器吸取少量（约0.15ml）汽油，点在色素所在的位置，并持续匀速缓慢注射汽油，汽油沿圆周扩散。 3.3观察实验现象 BA B A DC D C 图2 实验步骤 A.B.将滤液点在滤纸中央 ， C.将92号汽油点在滤液所在位置并持续注射 D．色素沿圆周扩散分离 4.本实验操作注意事项 4.1注射器使用时要去掉针头，不带针头操作 。带针头操作会把滤纸刺穿，无法进行层析。 4.2滤纸放在培养皿或大烧杯上点样及层析且滤液不能碰到培养皿壁，以免影响扩散效果 。 4.3使用注射器时注射器要与滤纸相垂直 。 4.4使用注射器点研磨液时等研磨液干了再重复 。 4.5使用注射器注射汽油时要连续匀速注射 。 5.实验的创新之处 5.1材料的选择： 大红花广泛种植于校园、公园及作为行道树。选择大红花叶作为实验材料，与菠菜比较，色素含量高