微生物实验-细菌人工培养与形态学检查.pptxVIP

微生物学与免疫学教研室;【基本要求】;;细菌的人工培养;二、细菌的人工培养;细菌的培养基：;（二）制备原则: 1.调配营养物质：蛋白胨（氮源），牛肉膏，氯化钠，蒸馏水。 2.调配PH：加入缓冲剂，保持PH稳定。 3. 消毒灭菌。 满足a充足的营养物质 b合适的PH值 c无菌;液体培养基; 液体培养基 固体斜面培养基 半固体培养基;2、按用途分：;(3).选择培养基：培养基中加入某种/些化学物质，能抑制某类细菌生长而使另一类细菌生长，从而将后者选择出来。 常用于肠道致病菌的分离与选择培养。 ;血平板;(5).鉴别培养基：根据各种细菌分解糖类和蛋白质的能力及代谢产物不同，在培养基中加入底物和指示剂来鉴别细菌。 ;鉴别培养基;三、各种培养基的接种;接种环的灼烧灭菌;3．接种。注意：整个实验操作过程都要非常小心，不要碰翻酒精灯，以免烧伤。;;（6）抽出接种环后，烧管口，塞棉塞，接种环灭菌。;（二）接种方法;固体平板培养基;;;2.固体斜面培养基接种法：;3.半固体培养基接种法：;4.液体培养基接种法;细菌培养法;实验一 细菌的人工培养;2.人体表面细菌的检查---手指（每组1个平皿） 方法：取一普通平皿培养基，一部分标记“前”，另一部分标记“后”，然后将手指在标记“前”的部分沾一下，洗手后在标记“后”的部分沾一下。放入37℃温箱培养24h后观察细菌的生长情况。;3.人体内部细菌的检查--咽喉部 方法：用“咳碟法”进行检查，取一个血琼脂平皿培养基，打开平皿盖，置于口腔前约10cm，对着平皿咳嗽几次，标记时间，姓名，然后放入37℃温箱培养24h后观察菌落特征。;二、外界因素对细菌的影响： 1.物理因素对细菌的影响 ： 紫外线：全班两份普通平板：一组大肠杆菌，一组葡萄球菌，比较紫外线对G+，G-的抑制作用。 方法： 取普通琼脂平皿，用用密集划线法接种细菌，然后将平皿盖遮盖一半，用紫外线照射30min，然后放入37℃温箱中孵育24h后观察。;2.化学消毒剂： 每组普通平板1个，密集划线法。 ;3、抗生素 密集划线法 操作同化学消毒剂 青霉素 链霉素 庆大霉素;三、细菌的生化实验： 1.葡萄糖发酵试验：蓝色半固体培养基 对面两小组，一组大肠杆菌，一组葡萄球菌 2. 吲哚试验：液体培养基，三菌均可。 3. 硫化氢试验：半固体无色培养基。 两小组大肠杆菌，两小组葡萄球菌，四小组变形杆菌。 ;四、增殖细菌：斜面培养基，三菌均可。各组分开，G+，G-。;问题讨论; 2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？;Thank you for your attention！;今天大家首先观察一下昨天接种的细菌的生长情况;1、液体培养基中的生长现象;2、半固体培养基中的生长现象;3、细菌在固体培养基中的生长现象;一、细菌在自然界的分布：;2.手指细菌的分布;3.咽喉部细菌的分布（先观察有无菌落） 上呼吸道是开放性的通道，一般寄居着一定数量和一定种类的微生物，它们在宿主和外环境的影响下保持着微生态的平衡。 ?? 呼吸道咽部常驻菌群种类较多，正常人咽部需氧菌中，甲型链球菌检出率最高，其次是奈瑟球菌属和表皮葡萄球菌。 ;;二、 理化因素对细菌的影响; （1）机制 ①促进菌体蛋白质变性或凝固。 ②干扰细菌酶系统和代谢。 ③损伤细菌的细胞膜，影响细菌的化学组成， 物理结构和生理活动，从而发挥防腐、消毒灭菌作用。 有些化学药品浓度高时能杀灭病原微生物，称为化学消毒剂；浓度低时能抑制细菌生长，称为防腐剂。;（2）化学消毒剂分类; 75％酒精 碘酒 84消毒液 G+菌： +/- ++ +++ G-菌： - + +++;青霉素-盘尼西林 弗莱明 1928 弗莱明、钱恩、弗罗里于 1945年共同获得诺贝尔医学和生理学奖。 青霉素是由青霉、曲霉等属真菌产生的一种抗生素。青霉素是人类发现的第一种能够治疗人类疾病的抗生素。但青霉素能引起某些受药者过敏反应，严重时可引起休克、甚至死亡，故应用前必须做皮肤试验。 ;;2. 葡萄糖发酵试验：蓝色半固体培养基 对面两小组，一组大肠杆菌，一组葡萄球菌 结果： 大肠杆菌组:变黄，云雾状生长 葡萄球菌组:紫色变浅？。 黄色(PH6.0); 指示剂:1％溴麝香草酚蓝