支气管肺白念珠菌感染大鼠血清β-防御素-2水平变化与意义.pdfVIP

·论文· 支气管肺白念珠菌感染大鼠血清p．防御素．2 水平变化及意义 静=鲁 刖 舌 p．防御素．2(human 胱氨酸的阳离子小分子多肽【11，具有广谱的抗微生物活性，而且还可以促进抗原 提呈细胞的成熟、作为趋化因子增加炎性细胞的募集等免疫调节作用[2,31，在微生 物入侵的天然免疫和获得免疫中均起着重要的作用。Harder等研究【4】发现HBD．2 对白念珠菌具有剂量依赖性的杀菌作用，一些肺部感染性疾病如慢性阻塞性肺疾 病、肺心病、肺炎以及肺结核等【5～，都证实HBD．2的诱导性高表达。HBD．2的高 表达在肺部粘膜防御感染上起着重要的作用【71。HBD．2在肺部念珠菌感染时的变 化如何?是否参与了肺部念珠菌感染的免疫调节作用值得研究。本研究通过动态 检测大鼠支气管肺白念珠菌感染后血清HBD．2变化水平，来探讨HBD．2在念珠茵 感染中可能的作用及意义。 材料与方法 一、材料 部提供。 标准白念珠菌菌株(编号070908853)由中国医科大学第一附属医院检验科微 生物室提供。 ELISA试剂盒购自RD公司，批号为CK-E90247R。 血清p防御素-2 天津生化制药 醋酸氢化可的松(25mg／支) 无菌生理盐水 通化东宝制药有限公司 二甲苯 济南汇丰达科技化工有限公司 多聚甲醛 上海化工新材料有限公司 。 6 NIKON倒置显微镜 中国医科大学呼吸疾病研究所 促凝管 美国BD公司 ．70*(2冰箱手术器械高压锅天平自动平衡微型离心机 恒温振荡培养箱电热恒温振荡水浴箱28℃恒温霉菌培养箱 50ml、10ml、5ml、1111l一次性注射器 二、方法 (一)实验动物分组 将36只大鼠随机分为正常组(指免疫功能正常，用生理盐水进行肺灌注)、 免疫低下组(指免疫功能受抑制后，用生理盐水进行肺灌注)和感染组(指免疫功 能受抑制后，用白色念珠菌悬液进行肺灌注)，每组12只。 (二)免疫功能低下动物模型建立【9,10] 分别于第1，3，5，7，9，11，13天给予免疫低下组和感染组大鼠皮下注射 氢化可的松，每次80 mg／kg,成功建立免疫功能低下模型；正常组于相同时间给予 同等剂量的生理盐水皮下注射。 (三)感染动物模型建立 1、白念珠菌混悬液的制备【81 取标准白念珠菌菌株，使用沙堡培养基在28℃真菌培养箱传代培养一代，使 用浊度法将白念珠菌混合配制成混悬液，使用浊度计调整菌量约为(1～5) x10Scfu／rnl。 2、建立感染模型【10】 于第14天开始，用4％水合氯醛(O．30 ml／1009)腹腔注射麻醉动物，麻醉成 功后，感染组经气管插管注射白色念珠菌混悬液0．2ml，正常组及免疫低下组经 气管插管注射同等剂量的生理盐水。 (四)分离血清及右肺下叶肺组织 1、分离血清 7 于感染后第3天及第7天分别随机选取各组6只大鼠，留取尾静脉血，3000 转／分离心10分钟，分离血清O．2ml，．70*(2冰箱保存集中检测。 2、解剖及分离肺组织 于感染后第3天及第7天取血后，依次逐只处死大鼠，将动物固定在操作台 上，紧贴皮肤剪去颈、胸部毛发，范围约6cmx3cm，碘酒酒精反复消毒皮肤三次， 沿颈部中线剪开皮肤，向下延伸到胸骨下端，钝性分离颈部气管，从上至下沿胸 骨中线开胸，剪破胸膜腔，于喉软骨下第二气管软骨