当归贝母苦参丸联合顺铂的抗肿瘤疗效及促瘤细胞凋亡的分子机制研究-中西医结合基础专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 目 录 摘要……1 Abstract…3 缩略语表5 前 言6 立题依据8 1. 肿瘤的病因病机8 2. 肿瘤治疗及中医药的抗肿瘤作用研究14 实验研究19 技术路线图...……………………………………………………………19 1.材料20 2.方法21 3.结果27 4 讨论40 结 语55 1. 结 论……………………...………………………………………………55 2. 问题与展望………………………………………………………………...…55 参考文献56 发表论文及获奖情况……………………………………………………………65 致 谢…………………………………………………………………………66 附 录…………………………………………………………………………67 I. 附图…. 67 II. 实验动物质量合格证……………………………………………. 77 III. 动物实验设施使用证…..……………..……………………….…………...78 当归贝母苦参丸联合顺铂的抗肿瘤疗效及促瘤细胞凋亡的分子机制研究 PAGE 10 PAGE 10 万方数据 摘 要 目的：研究当归贝母苦参丸单独及联合顺铂化疗 H22 肝癌荷瘤小鼠的抑瘤作用， 并通过血清学检测和肿瘤细胞凋亡相关分子表达水平的检测，探讨当归贝母苦参丸抗 肿瘤的细胞分子机制及对顺铂化疗的减毒作用，为临床抗肿瘤应用提供基础实验依 据。 方法：建立昆明小鼠 H22 肝癌细胞株移植瘤动物模型，随机分为四组：模型组、 顺铂对照组、当归贝母苦参丸组、当归贝母苦参丸联合顺铂组，另设正常空白对照组。 给药 15 天期间，观察小鼠的生存状态，测量小鼠的体重、瘤体长径和短径。给药第 15 日下午 6:00 开始进食，不禁水，次日处死小鼠。检查外周血常规；解剖取瘤体、 肝脏、胸腺、脾脏，计算抑瘤率与 q 值，计算肿瘤及器官指数； 生化方法检测血清 LDH、AST、ALT、AKP 的活力及 BUN 和 CR 浓度；ELISA 方法检测肿瘤组织 HIF-1α 的浓度；病理检查肿瘤、肝脏、胸腺和肾脏；免疫组织化学方法测定肿瘤组织中 caspase3 和突变型 p53 蛋白的表达；RT-PCR 方法检测 bax 和 bcl-2 mRNA 的表达。 结果:①大体观察，当归贝母苦参丸组优于模型对照组，当归贝母苦参丸及顺铂联 合给药组优于顺铂对照组。雄性小鼠当归贝母苦参丸组抑瘤率 34.1%，联合给药组抑 瘤率 75.6%，高于顺铂对照组抑瘤率 63.4%，q≈1.00；雌性小鼠当归贝母苦参丸组抑 瘤率 33.3%，联合给药组抑瘤率 80.0%，高于顺铂对照组抑瘤率 73.3%。q≈0.97。 ②与模型组比较，当归贝母苦参丸组肿瘤组织 HIF-1α显著降低（p0.01），突变 型 p53 蛋白和 bcl-2 mRNA 的表达显著下调（p0.01），caspase 3 蛋白和 bax mRNA 的表达显著上调（p0.01）； ③与顺铂对照组比较，当归贝母苦参丸联合顺铂组胸腺指数、白细胞计数、caspase 3 蛋白和 bax mRNA 的表达显著升高（p0.01）；当归贝母苦参丸联合顺铂组肿瘤组织 HIF-1α, 血清 LDH、AST、ALT、AKP 的活性及 BUN 显著降低（p0.01），血清 CR 降低不显著；当归贝母苦参丸联合顺铂组病理检查肝小叶、肾小管损伤明显减轻、胸 腺细胞数量增多；当归贝母苦参丸联合顺铂组突变型 p53 蛋白和 bcl-2 mRNA 的表达 未显著降低，但 bax/bcl-2 的比值显著升高。 结论：①当归贝母苦参丸具有抗 H22 肝癌移植瘤增殖的作用，其作用与下调肿瘤 组织 HIF-1α、突变型 p53 和 bcl-2 基因的表达，上调 caspase3、bax 的表达有关。② 当归贝母苦参丸与顺铂联合应用具有协同抗 H22 肝癌移植瘤增殖的作用，其协同机制 与上调 bax/bcl-2 比值、caspase3，下调肿瘤组织 HIF-1α有关。 ③当归贝母苦参丸与顺铂联合用药，可以减轻顺铂化疗引起的器官、组织损伤， 其机制与稳定正常组织细胞，减少 LDH、AST、ALT、AKP 的释放及升高白细胞有 关。 关键词:当归贝母苦参丸；顺铂； H22 肝癌；凋亡 Abstract Objective: To study the separate and combined tumor inhibition effect of Danggui Beimu Kushen decoction (DBKD) and Cis-diammin-odichloroplatinum(DDP) in treating H22 hepatocellu