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佛波酯对DA化疗方案增效减毒作用的研究-药理学专业论文.docx

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佛波酯对DA化疗方案增效减毒作用的研究-药理学专业论文

万方数据 万方数据 原创性声明 本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研 究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含任何其他个人 或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集 体,均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。 学位论文作者: 日期: 年 月 日 学位论文使用授权声明 本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品,知识产权归属郑州大学。 根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留或向国家有关部 门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅;本人授权郑州 大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索,可以采用影印、 缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学 位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时,第一署名单位仍然为郑 州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。 学位论文作者: 日期: 年 月 日 摘 摘 要 佛波酯对 DA 化疗方案增效减毒作用的研究 研究生 方寒冰 导 师 郭玉忠 副教授 郑州大学临床药理研究所 河南 郑州 450052 摘 要 研究背景和目的 急性髓系白血病(acute myeloid leukemia, AML)是一种常见的血液系统恶 性肿瘤,目前缓解治疗 AML 主要通过使用各种细胞毒性药物和造血干细胞移植。 然而治疗之后患者的总生存率不超过 12%,高死亡率主要与治疗相关的死亡、 诱导化疗失败和早期的复发有关。因此,寻找能够增加 AML 治疗效果和减少其 不良反应的药物,对改善 AML 的治疗具有重要的意义。 目前,在急性髓系白血病的化疗方案中,以柔红霉素联合阿糖胞苷为基础 的方案即 DA 方案是标准的诱导缓解治疗方案,据报道,该方案治疗 18-60 岁的 患者的完全缓解率在 65%-75%之间,长期的无病生存率为 30%左右,剂量增加 的诱导化疗能提高疗程的完全缓解率和缓解质量,但相关毒性亦随之增加,在 诱导治疗过程中患者的死亡率为 5%-10%。长期使用后出现的耐药性和严重的不 良反应制约着其在临床上的发展和应用。 12-氧-十四烷酰佛波醇-13-乙酸酯(12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate, TPA)是一种有效的蛋白激酶 C(PKC 酶)激动剂,它通激活 PKC 调节细胞信 号转导通路,影响细胞的增殖、分化、存活和凋亡。据文献报道,TPA 对多种 白血病细胞有很强的抑制增殖、诱导分化作用,而且增加白血病细胞对化疗药 物的敏感性。除此之外,TPA 可以快速恢复骨髓抑制患者外周白细胞数如中性 粒细胞数。在治疗白血病方面 TPA 已获准进行 II 期临床试验。因此本实验欲考 察 TPA 联合 DA 方案是否会影响用药的有效性和安全性,通过体外细胞实验观 I 察 TPA 联合 DA 方案对人白血病 K562、HL-60 细胞增殖抑制的影响,以及体内 动物实验观察 TPA 对 DA 化疗方案引起的不良反应影响。 方法 1 TPA 联合 DA 方案对白血病 K-562、HL-60 细胞增殖的影响 1.1 细 胞 培 养 人 白 血 病 细 胞 K562 和 HL-60 用 含 10% 胎 牛 血 清 的 RPMI-1640 培养基在 37℃,5%CO2 浓度,95%饱和湿度的无菌培养箱中培养, 每隔 3 天传代 1 次。 1.2 MTT 法检测细胞增殖 MTT 法检测 TPA 和 DA 方案单用以及联合作 用后对白血病 K-562、HL-60 细胞抑制率的变化,绘制量效曲线,并进行统计学 分析。 2 TPA 对 DA 化疗方案不良反应的影响 2.1 TPA 对 DA 化疗方案所致昆明鼠死亡率的影响 DA 方案一次性大剂 量尾静脉注射柔红霉素 20mg/kg 和阿糖胞苷 500mg/kg,之后给予 TPA 25μg/kg 治疗,观察 TPA 对 DA 方案所致动物死亡率的影响。 2.2 TPA 对 DA 化疗方案骨髓抑制的影响 小鼠尾静脉注射柔红霉素 6mg/kg 和阿糖胞苷 150mg/kg,连续给药三天,建立 DA 方案小鼠骨髓抑制模型。 一周之后尾静脉注射 TPA(12.5、25、50μg/kg),腹腔注射 EPO 500IU/kg,皮 下注射 GCSF 10μg/kg,连续给药三天,观察 TPA、EPO、GCSF 能否减轻 DA 方 案引起的骨髓抑制,比较各组外周血细胞计数的变化,并比较各组骨髓组织病 理变化。 2.3 TPA 对 DA 化疗方案心脏毒性的影响 小鼠尾静脉注射柔红霉素 6mg/kg 和阿糖胞苷 150mg/kg,连续给药三天,建立 DA 方案小鼠心脏损伤模型。 一周之后尾静脉注射 TPA(6.25、12.

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