镉与汞对人胚肝细胞毒性效应及镉与血清蛋白质的相互作用-劳动卫生与环境卫生学专业论文.docxVIP

华中科技大学硕士学位论文 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 PAGE 10 PAGE 10 镉与汞对人胚肝细胞毒性效应及镉与血清蛋白质的相互作用 硕士研究生：蓝晖翔 导 师：郑 丹 摘 要 目的：研究镉与汞单独及联合染毒对人胚肝细胞（L02 细胞）DNA 损伤及凋亡的作用。 在此基础上探讨了氯化镉（CdCl2）与牛血清白蛋白（BSA）相互作用机制，以了解 CdCl2 对蛋白质构象的影响。 方法：以不同浓度（0.01～100μmol/L）氯化镉（CdCl2）、氯化汞（HgCl2）及其混合 液对 L02 细胞染毒 24h，采用 MTT 法测定 L02 细胞的存活率，根据 Finney 法判断镉 与汞对 L02 细胞的联合作用类型；用单细胞凝胶电泳术（SCGE）和流式细胞术(FCM) 检测不同浓度镉与汞单独及联合染毒对 L02 细胞 DNA 损伤和细胞凋亡的影响。测定 CdCl2-BSA 体系在四个不同温度（ 298， 302 ， 306 ， 310 K ）下的荧光光谱；用 Stern-Volmer、Arrhenius、Van’t Hoff 和小分子与大分子配位方程分别处理荧光光谱实 验数据，计算出猝灭常数、活化能、热力学参数及结合常数和结合位点；根据 F?rster 荧光共振能量转移理论计算 CdCl2 与 BSA 之间的距离。同时，室温下测定研究体系的 紫外吸收光谱、同步荧光光谱、三维荧光光谱和圆二色谱，以探讨 CdCl2 对 BSA 结构 的影响。 结果：0.01μmol/L 的镉与汞单独及联合染毒可以刺激细胞的生长，但 1μmol/L 的镉汞 单独及联合染毒可显著抑制细胞的生长；镉与汞等浓度作用于 L02 细胞后，根据 Finney 法计算 Q=1.4，联合作用表现为相加作用；一定剂量的镉汞单独及联合作用于 L02 细 胞 24h 后，L02 细胞的 DNA 损伤率和细胞凋亡率均显著高于对照组，且随着染毒剂 量的增加，L02 细胞的 DNA 损伤率和细胞凋亡率也呈上升趋势。在四个不同温度（298， 302，306，310 K）下测得 CdCl2 与 BSA 相互作用的猝灭常数分别为 27.854、28.527、 32.223、33.664L mol-1，结合常数分别为 125.340，58.491，47.808，34.626M-1，活化 能为 13.24，相应的热力学参数 ΔS、ΔH 和 ΔG 分别为-223.364 Jmol-1K-1，-78.192KJmol-1， （-11.969，-10.216，-9.838，-9.136 KJmol-1）。由 F?rster 理论计算出 CdCl2 与 BSA 之间的距离为 2.24nm。紫外吸收光谱显示 CdCl2 加入后，BSA 的紫外吸收光谱强度没 有发生明显变化；同步荧光光谱结果显示，CdCl2 加入后，在△λ=15nm 和△λ=60nm 时 BSA 的同步荧光光谱荧光强度均下降，在△λ=60nm 时，BSA 的同步荧光光谱的荧 光强度下降更明显，且最大发射波长有轻微红移；三维荧光光谱显示，加入 CdCl2 后， BSA 峰 b 的荧光强度有所升高（273.3~282.5），峰 1 荧光强度略有下降(370.7~368.8)， 峰 2 强度显著降低(563.4~540.5)；BSA 的峰 1 荧光发射波长有轻微红移，峰 2 荧光发 射波长有轻微蓝移；圆二色谱结果显示随着 CdCl2 浓度增加，BSA 的 α 螺旋含量先有 所增加（从 51.93 到 52.31），后逐渐降低（从 52.31 到 21.39）。 结论：镉与汞的联合作用为相加作用，镉与汞单独及联合染毒可引起 L02 细胞的 DNA 损伤和细胞凋亡，且存在一定的剂量效应关系。CdCl2 对 BSA 的猝灭过程主要是动态 猝灭，CdCl2 与 BSA 之间有较强的结合力。CdCl2 与 BSA 间的作用是一个由焓驱动的 自发过程，其相互作用的主要作用力是氢键和范德华力，CdCl2 与 BSA 之间可能通过 有效的能量转移而使 BSA 发生荧光猝灭。同时，CdCl2 可影响 BSA 的微环境和构象。 关键词：镉；汞；毒性效应；牛血清白蛋白；荧光光谱 The toxic effects of cadmium and mercury on L02 cells and the interaction between cadmium and serum protein Master candidate: Lan Huixiang Academic adviser: Zheng Dan Abstract Objective To study the effects of cadmium and mercur