德国奥德河水中生物膜形态及其生物多样性的研究-环境工程专业论文.docx

Classified Index: X703.1 U.D.C.: 628.35 Dissertation for the Doctoral Degree in Engineering STUDY ON MORPHOLOGY AND BIODIVERSITY OF BIOFILM OF RIVER ODER Candidate： Qin Songyan Supervisor： Prof. Ma Fang Associate Supervisor： Prof. Dr.Ulrich Szewzyk Academic Degree Applied for： Doctor of Engineering Speciality： Environmental Engineering Affiliation： School of Munici. Envir. Eng. Date of Defence： June,2008 Degree-Conferring-Institution： Harbin Institute of Technology 摘要 摘 要 - - I - 摘 要 河流自净是污染河流进行自我修复的重要能力。生物膜是河流中相对稳 定存在的微生物群落结构，在河流自净过程中发挥着重要的作用。对河流生 物膜的形成过程及其生物多样性的探讨，对于理解河流自净过程及河流内污 染物质的转移具有重要的意义。本研究以德国奥德河流域的生物膜为研究对 象，从微生物学角度尤其是采用分子生物学手段来研究河流生物膜的群落结 构，采用扫描电镜与元素分析探测器联用、CARD-FISH、DGGE 等分子生 物学手段对生物膜的形态及组成及生物膜的群落结构及动态变化进行研究， 并对奥德河流域的生物膜上的铁锰氧化细菌进行了分离，确定了铁锰氧化细 菌的系统进化地位及其特征。 对奥德河生物膜的元素组成分析确定，生物膜主要的金属元素为铁和 锰，铁锰氧化物为无定形。生物膜在形成初期即 24h 内，以铁锰氧化细菌附 着为主，铁锰氧化细菌在载体上形成具有特异的胞外聚合物结构的大小为 1mm 的微菌落。而对成熟生物膜的超微结构研究表明，生物膜内存在着具 有特异 EPS“洞穴”结构的杆菌，并存在着其他的能够形成 EPS 的鞘细 菌、浮霉菌属、生芽细菌，且大多具有附着功能。 对奥德河生物膜上铁锰氧化细菌的系统进化地位分析得知：Oder 河铁 锰氧化细菌全部属于 Beta-菌纲，分布于五个进化分支内，五个进化分支的 代表菌属为 Comamonadaceae bacterium MWH55、Leptothrix dischophora、 Leptothrix mobilis、Ideonella sp.及 Spherotilus natant。部分铁锰氧化细菌在 R2A 液体培养基中表现出明显的自絮凝特征，形成 1.5 cm 自凝集颗粒。 BIOLOG 对部分菌种不同碳源利用能力的测定表明：分离菌种对糖类、梭酸 类和氨基酸类培养基三大碳源的利用强度较大。不同菌种的铁锰氧化细菌在 铁二号培养基中形成不同形态的铁锰氧化物菌体结构。 采用 CARD-FISH 对奥德河流域生物膜细菌群落组成、动态变化及空间 分布研究表明，Beta-变形菌纲是两个取样点生物膜的主要组成菌群。随着 膜龄的增长，Anglerteich 与 Mummert 生物膜上真细菌的比例也相应增加。 Anglerteich 与 Mummert 取样点相比，7 天膜龄的生物膜中 alpha-、beta-、 gamma-变形菌纲细菌比例均高于 Mummert 取样点的生物膜；而在 15 天膜 龄的生物膜中，除 gamma-变形菌纲细菌比例有所增加，alpha-及 beta-变形 菌纲细菌比例均低于 Mummert 取样点的生物膜。对 Oder 河流域膜龄为 哈尔滨工业大学工学博士学位论文 哈尔滨工业大学工学博士学位论文 - - II - 24h、7d、15d 的生物膜细菌群落的空间分布研究表面：膜龄 24h 的生物膜 细菌群落仅与 beta 探针杂交发出信号，当膜龄 7d 时，Anglerteich 生物膜上 的真细菌以长链鞘细菌为主，而 Mummert 7d 膜龄的生物膜上的真细菌形态 更为多样 , 细菌之间的相互关系更为复杂。存在于 Anglerteich 生物膜上 alpha 变形细菌的形态及细菌间的关系明显复杂于 Mummert 生物膜，并发现 了生丝微菌属或柄杆菌属黏 附寄生于鞘细菌的结构。 Beta-探针主要是与 Anglerteich 及 Mummert 7d 膜龄生物膜上的鞘细菌进行杂交。Anglerteich 7d 生物膜上能与 Gamma- 探针杂交发出信号的细菌主要为长丝状菌体，而 Mummert 7d 生物